Calbryte 520 AM，鈣離子熒光探針，AAT Bioquest

細胞滲透性鈣離子指示劑 · 高靈敏度 · 低毒性

Calbryte 520 AM 是AAT Bioquest公司開發的一種細胞滲透性熒光鈣離子（Ca²⁺）指示劑，貨號為 20650。該產品主要用于實時監測活細胞內的鈣離子濃度動態變化，具有高靈敏度、低毒性以及與多種熒光探針兼容的特點。

·主要用途：實時監測活細胞內鈣離子濃度的動態變化

·適用領域：心血管研究、神經科學、腫瘤學、免疫學等

化學性質與工作原理

化學結構：

Calbryte 520 AM 為乙酰氧基甲酯（AM）衍生物，可通過被動擴散進入細胞。細胞內酯酶水解 AM 基團后，釋放出游離的 Calbryte 520 熒光團，與 Ca?? 結合后熒光強度顯著增強。

光譜特性：

1. 激發波長（λEx）：488 nm（與藍光激光兼容）

2. 發射波長（λEm）：515–540 nm（綠色熒光范圍）

3. 信號增強：與 Ca?? 結合時熒光信號可提升超過 100 倍，信噪比（SNR）高

親和力特點：

Calbryte 520 對 Ca?? 的親和力較低（Kd 約為 1–2 μM），適合檢測快速、高幅度的鈣瞬變，避免高親和力染料（如 Fura-2）的飽和問題。

核心優勢：

? 長時程穩定性：相較于 Fluo-4 AM 等傳統染料，Calbryte 520 AM 在細胞內保留時間長達 24 小時，無需添加有機陰離子轉運抑制劑（如 probenecid）。

? 多通道兼容性：其光譜特性使其可與紅色熒光探針（如 R-CEPIA1SR，用于肌質網鈣成像）同時使用，實現雙通道鈣信號監測。

? 高靈敏度與低背景：水解后的熒光團與 Ca²⁺結合時產生明亮的熒光信號，背景干擾小，適用于活細胞動態成像。

應用場景與實驗案例

1. 心血管研究

心肌細胞鈣動力學

用于人誘導多能干細胞分化心肌細胞（hiPSC-CMs）的胞質鈣濃度監測，結合 R-CEPIA1SR 探針同步檢測肌質網鈣釋放，研究心律失常機制（如兒茶酚胺敏感性多形性室速，CPVT）。

鈣瞬變與動作電位同步記錄

與膜電位探針 FluoVolt 聯用，實現鈣信號（Calbryte 520）與動作電位（FluoVolt）的雙通道光學映射（100–1000 fps）。

2. 神經科學

神經元光熱刺激研究

在 Ti3C2Tx MXene 材料介導的神經刺激實驗中，Calbryte 520 AM 用于實時監測背根神經節（DRG）神經元在光熱刺激下的鈣內流，驗證神經興奮性。

鈣信號與凋亡關聯研究

在巨噬細胞中，通過鈣成像分析炎癥或藥物處理后的鈣響應。

3. 腫瘤與免疫學

腫瘤細胞鈣通量檢測

用于評估電磁場（如 5 mT 低頻磁場）對腫瘤細胞內鈣濃度的影響，揭示其抑制腫瘤生長的機制。

免疫細胞激活分析

在骨髓中性粒細胞（BMNs）中，監測 PAF（血小板活化因子）刺激下的鈣信號動態，研究藥物（如人參皂苷 Rg5）的調控作用。

4. 骨與組織工程

成骨細胞鈣響應

在電磁治療（EMTT）研究中，Calbryte 520 AM 用于檢測骨祖細胞（hOBs）內鈣濃度的升高，驗證電場促進骨礦化的機制。

實驗操作指南

1. 染料配制：將 Calbryte 520 AM 溶于含 0.04% Pluronic F-127 的緩沖液（如 HBSS 或 KRP-HEPES），終濃度通常為 5 μM。

2. 孵育條件：37°C 避光孵育 30–60 分鐘，隨后室溫平衡 15–30 分鐘以促進酯酶水解。

3. 洗滌與成像：用緩沖液洗滌 3 次后，在熒光顯微鏡或微孔板讀數儀（激發/發射：490/525 nm）中觀察信號。

注意事項

·避免長時間光照，防止光漂白。

·實驗設計中需設置陰性對照（如未染色細胞）和陽性刺激（如離子霉素）以驗證染料響應。

總結

Calbryte 520 AM 憑借其長時程穩定性、低背景噪聲和廣泛兼容性，成為活細胞鈣成像的首選工具之一。無論是心血管疾病機制研究、神經興奮性調控，還是腫瘤治療新策略開發，該產品均展現出強大的應用潛力。歡迎垂詢，AAT Bioquest中國區總代理，艾美捷科技！