鈣離子熒光探針Fluo-3,AM,超級純，細胞內鈣離子動態精準監測

鈣測量對于許多生物學研究至關重要。結合Ca2+后顯示光譜響應的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細胞術、熒光光譜和熒光微孔板讀數器來研究細胞內游離Ca2+濃度的變化。Fluo-3和Rhod-2是可見光興奮性鈣指示劑中最常用的。Fluo-3指示劑廣泛應用于流式細胞術和共聚焦激光掃描顯微鏡。最近，Fluo-3，AM已被廣泛用于基于細胞的高通量篩選試驗，用于功能性GPCR試驗。Fluo-3基本上是不熒光的，除非與Ca2+結合，并且在飽和Ca2+時的量子產率為~0.14，Ca2+的Kd為390 nM。

艾美捷鈣離子熒光探針Fluo-3,AM,超級純：

貨號：AAT-21011

單位尺寸：1毫克

解離常數（Kd，納摩爾）：390

分子量：1129.85

溶劑：DMSO

消光系數（厘米^-1 摩爾^-1）：86,0001

激發（納米）：506

發射（納米）：515

量子產率：0.151

僅限研究使用（RUO）

儲存：冷凍（< -15°C）；盡量減少光照

CAS：121714-22-5

激發：FITC

發射：FITC

推薦板：黑色壁，透明底部

激發：490

發射：525

截止：515

推薦板：黑色壁，透明底部

儀器規格：底部讀取模式，可編程液體處理

制備母液：除非另有說明，所有未使用的母液應在制備后分裝成單次使用的小份，并儲存在-20°C。避免反復凍融。

Fluo-3 AM 超純級別母液：在高質量的無水DMSO中制備Fluo-3 AM的2至5 mM母液。

制備工作溶液：

Fluo-3 AM 超純級別工作溶液

在實驗當天，將Fluo-3 AM溶解在DMSO中，或將指示劑母液的小份解凍至室溫。

在您選擇的緩沖液中（例如，Hanks和Hepes緩沖液）用0.04%的Pluronic? F-127制備2至20 ?M的Fluo-3 AM工作溶液。對于大多數細胞系，建議使用最終濃度為4-5 μM的Fluo-3 AM。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須通過實驗確定。

注意：非離子洗滌劑Pluronic? F-127有時被用來增加Fluo-3 AM的水溶性?？梢詮腁AT Bioquest購買各種Pluronic? F-127溶液。

注意：如果您的細胞包含有機陰離子轉運體，可以在染料工作溶液中加入丙磺舒（1-2 mM）（最終濃度為0.5-1 mM），以減少脫酯化指示劑的泄漏?？梢詮腁AT Bioquest購買各種ReadiUse?丙磺舒產品，包括水溶性、鈉鹽和穩定溶液。

樣品實驗協議：

以下是AAT推薦的將AM酯加載到活細胞中的協議。此協議僅提供指導，并應根據您的具體需求進行修改。

在生長介質中準備細胞過夜。

第二天，將1X Fluo-3 AM工作溶液添加到您的細胞板中。

注意：如果您的化合物與血清發生干擾，在染料加載前用新鮮的HHBS緩沖液替換生長介質。

將染料加載的板在37°C的細胞培養箱中孵育30至60分鐘。

注意：將染料孵育超過2小時可以提高某些細胞系的信號強度。

將染料工作溶液替換為HHBS或您選擇的緩沖液（如果適用，含有陰離子轉運體抑制劑，如1 mM丙磺舒），以去除多余的探針。

根據需要添加刺激劑，并同時使用配備FITC濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統的熒光板讀取器（如FDSS、FLIPR或FlexStation）在490/525 nm截止515 nm處測量熒光。

鈣離子熒光探針Fluo-3,AM,超級純文獻參考：

A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux

Authors: Bailey S, Macardle PJ.

Journal: J Immunol Methods (2006): 220

Functional fluo-3/AM assay on P-glycoprotein transport activity in L1210/VCR cells by confocal microscopy

Authors: Orlicky J, Sulova Z, Dovinova I, Fiala R, Zahradnikova A, Jr., Breier A.

Journal: Gen Physiol Biophys (2004): 357

Comparison of human recombinant adenosine A2B receptor function assessed by Fluo-3-AM fluorometry and microphysiometry

Authors: Patel H, Porter RH, Palmer AM, Croucher MJ.

Journal: Br J Pharmacol (2003): 671

Measurement of the dissociation constant of Fluo-3 for Ca2+ in isolated rabbit cardiomyocytes using Ca2+ wave characteristics

Authors: Loughrey CM, MacEachern KE, Cooper J, Smith GL.

Journal: Cell Calcium (2003): 1

[Ca2+]i following extrasystoles in guinea-pig trabeculae microinjected with fluo-3 - a comparison with frog skeletal muscle fibres

Authors: Wohlfart B., undefined

Journal: Acta Physiol Scand (2000): 1