ReadiLink xtra快速iFluor 350抗體標記試劑盒(與BSA兼容)解決方案

ReadiLink?xtra快速抗體標記試劑盒基本上只需要2個簡單的混合步驟，不需要柱純化。ReadiLink?試劑盒中使用的預激活iFluor?350非常穩定，與抗體具有良好的反應性和選擇性。該試劑盒具有標記約2x50 ug抗體的所有基本成分。試劑盒中提供的兩瓶預活化iFluor?350染料中的每一瓶都針對標記約50?g抗體進行了優化。ReadiLink?xtra iFluor?350快速抗體標記試劑盒提供了一種方便而穩健的方法，可以用亮藍色熒光iFluro?350熒光團標記單克隆和多克隆抗體。AAT Bioquest的iFluor?染料經過優化，可用于標記蛋白質，特別是抗體。這些染料明亮、耐光，對蛋白質的淬滅作用最小。它們可以被熒光儀器的主要激光線（例如350、405、488、555和633nm）很好地激發。

艾美捷ReadiLink xtra快速iFluor 350抗體標記試劑盒(與BSA兼容)：

貨號：AAT-1950

單位尺寸：2次標記

修正因子（260納米）：0.83

修正因子（280納米）：0.23

消光系數（厘米^-1 摩爾^-1）：200001

激發（納米）：345

發射（納米）：450

量子產率：0.95

預期用途 僅限研究使用（RUO）

組分：

組分A：預活化的iFluor? 350 2瓶

組分B：反應緩沖液 1瓶（20微升）

組分C：TQ?-染色的猝滅緩沖液 1瓶（20微升）

樣品實驗協議：

運行偶聯反應

將蛋白質工作溶液（溶液A）加入標記染料的一個瓶中（組分A），并通過反復吹打幾次或短時間渦旋瓶來充分混合。

注意：如果標記100微克蛋白質，使用兩瓶（組分A）標記染料，將100微克蛋白質分成2 x 50微克蛋白質，并分別與一瓶標記染料反應。然后在下一步中合并兩個瓶。

將偶聯反應混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意：如果需要，偶聯反應混合物可以旋轉或搖晃更長時間。

停止偶聯反應：

加入5微升（對于50微克蛋白質）或10微升（對于100微克蛋白質），即總反應體積的10%的TQ?-染色的猝滅緩沖液（組分C）到偶聯反應混合物中；充分混合。

在室溫下孵育10分鐘。標記的蛋白質（抗體）現在可以使用。

蛋白質偶聯物的儲存：

蛋白質偶聯物應在載體蛋白存在下（例如，0.1%牛血清白蛋白）以> 0.5毫克/毫升的濃度儲存。對于更長時間的儲存，蛋白質偶聯物可以凍干或分成單次使用的小份，并儲存在≤ -20°C。

工作溶液的準備：

蛋白質工作溶液（溶液A）

對于標記50微克蛋白質（假設目標蛋白質濃度為1毫克/毫升），將5微升（總反應體積的10%）的反應緩沖液（組分B）與50微升的目標蛋白質溶液混合。

注意：如果您有不同的蛋白質濃度，請相應調整蛋白質體積，以使標記反應中有大約50微克的蛋白質可用。

注意：對于標記100微克蛋白質（假設目標蛋白質濃度為1毫克/毫升），將10微升（總反應體積的10%）的反應緩沖液（組分B）與100微升的目標蛋白質溶液混合。

注意：蛋白質應溶解在1X磷酸鹽緩沖液（PBS）中，pH 7.2 - 7.4；如果蛋白質溶解在甘氨酸緩沖液中，必須對其進行透析，以對抗1X PBS，pH 7.2 - 7.4，或者使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（產品編號UFC501008來自Millipore）以去除廣泛用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽（如硫酸銨和醋酸銨）。

注意：含有0.1至0.5%牛血清白蛋白（BSA）的不純抗體或穩定化的抗體將被很好地標記。

注意：為了獲得最佳的標記效率，建議最終蛋白質濃度范圍為1-2毫克/毫升，低于1毫克/毫升的濃度會顯著降低偶聯效率。

圖：HeLa細胞微管蛋白的免疫熒光染色。HeLa細胞用4%PFA固定，用0.1%Triton X-100滲透并封閉。然后用兔抗微管蛋白單克隆抗體孵育細胞，并用ReadiLink?xtra Rapid iFluor?350抗體標記試劑盒（目錄號1950）標記的山羊抗兔IgG染色。

Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麥胚芽凝集素，AF488標記文獻參考：

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.

Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min

Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.

Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S

Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.

Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald

Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.

Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L

Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.

Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi

Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526