緩沖液和儲備溶液

PBS，三乙醇胺緩沖液(TBS) 和三乙醇胺-吐溫(TBS Tween) 緩沖液的配制

PBS (10x)

80g 氯化鈉

2.0g 氯化鉀

14.4g 磷酸氫二鈉

2.4g 磷酸二氫鉀

加入800ml 超純水，混勻，用純鹽酸調節pH 值至7.4，然后加入超純水至1L。

10倍三乙醇胺緩沖液

24.23g 氨基丁三醇氯化氫

80.06g 氯化鈉

加入800ml 超純水，混勻，用純鹽酸調節pH 值至7.6，然后加入超純水至1L。

三乙醇胺-吐溫緩沖液（含0.1% 的吐溫20）

配制1L 溶液：取100ml 10 倍三乙醇胺緩沖液加890ml 超純水，再加入10ml 吐溫20 (10%)

吐溫20 很粘稠會粘在量取的槍頭上，要確定加入三乙醇胺緩沖液的變性劑體積足夠。建議使用10% 的溶液進行配制，這樣會比用未稀釋
的吐溫20 溶液容易配制。

蛋白質印跡

裂解液

這些緩沖液可保存于4°C 幾周，分裝后凍存于-20°C 可以保存一年。

乙基苯基聚乙二醇（NP-40）緩沖液

150mM 氯化鈉

1.0% 乙基苯基聚乙二醇（也可用0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100) 代替）

50mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫(Tris-HCl)，pH 值8.0

蛋白酶抑制劑

RIPA緩沖液（放射免疫沉淀測定緩沖液）

150mM 氯化鈉

1.0% 乙基苯基聚乙二醇或0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚

0.5% 去氧膽酸鈉

0.1% SDS（十二烷基硫酸鈉）

50mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值8.0

蛋白酶抑制劑

RIPA 緩沖液的變性能力要強于乙基苯基聚乙二醇或聚乙二醇辛基苯基醚，因其活性成分包含了離子型去垢劑SDS 和去氧膽酸鈉，在核膜降解和細胞核提取時非常有用。RIPA 緩沖液產生的背景很低，但其也可使蛋白酶變性。

10% 的去氧膽酸鈉儲存液（5 克溶于50ml）必須避光保存。

三羥甲基氨基甲烷-氯化氫緩沖液

20mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值7.5

蛋白酶抑制劑

三羥甲基氨基甲烷-聚乙二醇辛基苯基醚緩沖液（用于細胞骨架蛋白）

10mM 三羥甲基氨基甲烷，pH 值7.4

100mM 氯化鈉

1mM 乙二胺四乙酸

1mM 乙二醇雙(2-氨基乙醚)四乙酸

1% 聚乙二醇辛基苯基醚

10% 甘油

0.1% 十二烷基硫酸鈉

0.5% 去氧膽酸鈉

蛋白酶抑制劑

10% 的去氧膽酸鈉儲存液（5 克溶于50ml）必須避光保存。

非變性裂解緩沖液

20mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值8.0

137mM 氯化鈉

10% 甘油

1% 乙基苯基聚乙二醇/聚乙二醇辛基苯基醚

2mM 乙二胺四乙酸

蛋白酶抑制劑

（用于可溶于變性劑的抗原，其天然型被相應抗體識別。聚乙二醇辛基苯基醚可替代乙基苯基聚乙二醇無去垢劑型可溶蛋白裂解液）

5mM 乙二胺四乙酸

0.02% 疊氮化納

磷酸鹽緩沖液

蛋白酶抑制劑

一些可溶性蛋白不需要使用去垢劑。此緩沖液可用于機械裂解細胞，如用注射器反復抽壓或用Dounce 勻漿機勻漿。

變性裂解液/用于不容于去垢劑的抗原的裂解液

1% 十二烷基硫酸鈉

5mM 乙二胺四乙酸

使用前加入：

10mM 的二硫蘇糖醇或β-巰基乙醇

蛋白酶抑制劑

15U/ml DNA 酶I

僅識別變性蛋白的抗體不會與天然型蛋白結合。在收集和裂解細胞時，要將重懸細胞的變性裂解緩沖液加熱。此方法也可用于非離子型去垢劑無法提取的抗原。使用DNA 酶I 有助于從染色質中抽提蛋白。

電泳和印跡緩沖液

Laemmli 2 倍緩沖液/上樣緩沖液

4% 十二烷基硫酸鈉

10% 2-巰基乙醇

20% 甘油

0.004% 溴酚藍

0.125M 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫

測定pH 值，調整pH 值至6.8

電泳緩沖液

25mM 三羥甲基氨基甲烷堿

190mM 甘氨酸

0.1% 十二烷基硫酸鈉

測定pH值，如有必要的話，調整pH 值至8.3

轉移緩沖液（濕式）

25mM 三羥甲基氨基甲烷堿

190mM 甘氨酸

20% 甲醇

如有必要的話，pH 值應調節至8.3

大于80 kDa 的蛋白，建議十二烷基硫酸鈉終濃度為0.1%。

轉移緩沖液（半干式）

48mM 三羥甲基氨基甲烷

39mM 甘氨酸

20% 甲醇

0.04% 十二烷基硫酸鈉

封閉緩沖液

5% 牛奶或BSA（牛血清白蛋白）

加入三乙醇胺-吐溫緩沖液。充分混合后過濾。如不過濾會聚集成斑點，這種小暗點會在顯色時影響印跡的效果。