免疫沉淀—如何用IgM 抗體進行

用IgM 抗體進行免疫沉淀

由于IgM 抗體的五聚體結構，所以很難用于免疫沉淀實驗。IgM 抗體還不能很好地結合蛋白A 或蛋白G。有兩種方法可供選擇：

a 蛋白L 珠子

蛋白L是一個36 kDa 的免疫球蛋白結合蛋白，可從大消化鏈球菌純化。蛋白L 可以結合抗體的輕鏈（而蛋白A 和G 結合抗體重鏈的Fc 段）。

蛋白L 比蛋白A 或G 結合抗體類型范圍更廣泛，因為重鏈的任何一部分都不參與結合相互作用。它能夠結合所有抗體類型，包括IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD。單鏈可變區段（ScFv）和Fab 片段也能結合蛋白L。

蛋白L 僅限于結合那些含有kappa(κ) 輕鏈（即VL 功能區）的免疫球蛋白。在人類和小鼠中，以kappa (κ) 輕鏈為主。其余的免疫球蛋白有lambda(λ) 輕鏈，它不結合蛋白L。此外，蛋白L 僅能有效結合kappa 輕鏈的某些亞型。例如，它結合人類VκI、VκIII 和VκIV 亞型，但不結合VκII 亞型。對于小鼠，僅限于結合那些具有VκI 輕鏈的免疫球蛋白。

利用蛋白L有幾個優勢：

1.蛋白L 不能結合牛、綿羊或山羊的抗體，因此非常適合從含牛血清的細胞培養液中純化小鼠IgM。

2.蛋白L 可以結合多種動物來源抗體的kappa 輕鏈而不干擾抗原結合位點，因此非常適用于用IgM 抗體的免疫沉淀。

3. 它能結合所有類別的免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD），因此對IgM 純化特別有用，因為IgM 不能用蛋白A 或G 純化。