PVDF 膜上蛋白的可逆染色

Western

雜交時，為確認蛋白是否轉至PVDF膜上，可用下列方法對膜上蛋白進行可逆性染色。

1.氨基黑染色

染液：0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid.

染色：將 PVDF 膜置于染液中染色數鐘，ddH2O 脫色。

2.考馬氏亮藍染色

染液：0.1% Coomassie Brilliant Blue R-250 (w/v) and 50% methanol (v/v)

脫色液：40% methanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v)

染色：將 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.，脫色液脫色。

3．麗春紅染色PonceauS

染液：0.2%w/vPonceauSininTCA(3%v/v)

染色：將 PVDF膜置于染液中染色 5min

脫色：ddH2O脫色

三、銀染

PAGE 膠上蛋白質的銀染方法有數百種，其原理相似，具體步驟各不相同。銀染為蛋白質的非特異性染色，呈“爆炸性”反應模式，用于蛋白定量時準確性差，但其敏感度高、簡便易行，仍被廣泛應用。下面列舉的這三種方法為常用的雙向電泳凝膠染色法，可與質譜兼容。其中方法 1 敏感性最高，方法 3 背景最低 、
對比度好。

注意事項：

1.應嚴格按照操作步驟進行；

2.顯色前最好更換新染色盤；

3.顯色時變為黃色或棕色后立即棄去，更換新鮮顯色液，一般來說染一塊膠應配制 500ml 染液。更換 2-3 次；

4.市售甲醛的濃度為 37%；

5.三種方法均與質譜兼容，Blum 法敏感性高，但背景呈淡黃色，EMBL法次之但背景較低，染色點較黑。Vorum 相對不敏感，但背景清晰，信噪比高。