大腸桿菌質粒 DNA的提?。?堿裂解法 ）

此方法適用于小量質粒DNA 的提取提取的質粒 DNA 可直接用于酶切PCR擴增 。

1.取 1.5ml 細菌培養物于 EP 管中，4000rpm 離心 1 分鐘，棄上清液，使細菌沉淀盡量干燥；

       2. 將細菌沉淀重懸于用冰預冷的 100 ?l 溶液 I (50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/LEDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0) 中，劇烈振蕩；

3. 加入 200 ?l 新配制的溶液 II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，蓋緊 EP 管口，快速顛倒離心管 5 次，以混合混合物，確保離心管的整個內表面與溶液II 接觸，不要渦旋，置于冰浴中；

4. 加入 150 ?l 預冷溶液 III(每 100 ml 的溶液 III 中含 60 ml 5 mol/L 乙酸鉀，11.5ml 冰乙酸，28.5 ml H2O)，蓋緊 EP 管口，反復顛倒數次，使溶液 III 在粘稠的細菌裂解物中分散均勻，之后將管置于冰上 3~5 分鐘；

5. 在最大轉速下離心 5min，取上清液于另一新 EP 管；

6. 用兩倍體積的乙醇室溫沉淀雙鏈 DNA，振蕩混合于室溫放置 2 分鐘，最大轉速離心 5 分鐘；

7. 小心吸去上清液，將離心管倒置于濾紙上，以使所有液體都流出，在將附于管壁的液滴除盡；

8. 加 1ml 70％乙醇洗滌沉淀，振蕩混合，用 12,000g 離心 2 分鐘，棄上清，將開口的 EP 管置于室溫使乙醇揮發，直至 EP 管中內沒有可見的液體存在（5～10 分鐘），用適量的 ddH2O 溶解；

9. 用 0.5?l 的 RNase 37℃溫育 5~10 分鐘；

10. 電泳鑒定。