酶切

1.酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內切酶和配套 Buffer。

2. 在離心管中加入如下成分：

10×Buffer

1ul

待切樣品

xul

酶

0.5-1ul

加水補足 10ul

3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。

4. 將離心管置于 37℃中溫育 1-3hr，若待切樣品為 PCR 產物，則可將反應時間適當延長。

5. 用未酶切的質粒作為對照，瓊脂糖電泳鑒定酶切結果。

注：當酶切樣品用于回收而不是鑒定時，可按比例適當加大反應體積。雙酶切可選用二者活性都較高的 Buffer 或者通用 Buffer，但要注意不能有星反應。