好梳子;"/>
TECHNICAL COLUMN
學習資源1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;
2.根據欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);
3.放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;
4.室溫下 30~45 分鐘后凝膠完全凝結,小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內 ;
5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面 1mm 為宜,如樣品孔內有氣泡,應設法除去;
6.在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內;
7.接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記 DNA 樣品由負極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負)。一般 60~100V 電壓,電泳 20~40min 即可;
8.根據指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;
9.電泳完畢,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標準 Marker 比較被擴增產物的大小。


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