IP利器,瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體

       什么情況下會選擇標簽抗體用于免疫沉淀呢？

       當某些目標蛋白沒有對應的特異性抗體（eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識別處于天然構象的蛋白）而無法進行免疫沉淀時，可以采用一個表位標記蛋白后，再選擇針對此表位的標簽抗體來進行免疫沉淀。

        什么樣的標簽適合用于免疫沉淀呢？

       Flag（DDDDK）標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成，因此它不會占據其他表位與結合域，避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發生改變。由于它的親水性特點，Flag標簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。  Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統，廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。

       為什么推薦使用Flag標簽抗體偶聯的瓊脂糖/磁珠？

        與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復合物結合的步驟。偶聯抗體直接和目標蛋白結合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。   

•        看到這里，您肯定會問，Protein A/G的缺點是什么？

1.        耗時：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作

2.        效果差：當抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時，ProteinA/G和抗體結合能力弱

3.        背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結合，產生非特異性結合，導致高背景

       這就是艾美捷科技為您推薦瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體的原因：   

       瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體，優勢更加突出：  

•        高特異性—高特異性單克隆標簽抗體可實現高產量和高純度免疫沉淀

•        低背景—穩定、預封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結合

•        規格靈活：100ul, 400ul, 2ml，多規格可供選擇。滿足不同規模的免疫沉淀需求

•        操作方便—產品說明書提供了免疫沉淀優化方案，一次免疫沉淀時間約1 - 2小時

•        兼容性強—填料可以兼容手動及自動化操作

       瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體使用說明：

•        瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時候，傳統的瓊脂糖微球偶聯抗體是IP實驗的完美選擇。（瓊脂糖：每個樣品加入20ul懸液）

•        在IP實驗中，由于所有的相互作用均發生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌，且孵育時間短，在日常小規模、快速處理多個樣品的IP實驗時，磁珠偶聯抗體更簡單、更快速。（磁珠：每個樣品加入10-20ul懸液）

•        提供形式：液體（抗體-瓊脂糖/磁珠復合物：保護液=1:1，50%的懸浮液）

•        儲存方式：4°C可保存一年，瓊脂糖偶聯標簽抗體避免凍融和渦旋；磁珠偶聯標簽抗體避免凍融和離心

       瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體說明書：

       瓊脂糖偶聯Flag標簽抗體：https://www.abbkine.com/datasheet/A02010AGB.pdf  

       磁珠偶聯Flag標簽抗體：https://www.abbkine.com/datasheet/A02010MGB.pdf

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