m6A RNA甲基化定量試劑盒（P-9005）中文說明書及常見問題解答

在之前的文章中，我們復盤了m6A甲基化疑難雜癥&治療方法

N6-甲基腺嘌呤(m6A）是真核生物最常見和最豐富的RNA分子修飾，占所有 RNA 甲基化的 80% 以上。隨著RNA甲基化研究越來越熱，科學研究界刮起了一陣m6A RNA甲基化研究的颶風。站在風口的研究學者們，都選擇了Epigentek品牌的P-9005產品EpiQuik M6A RNA Methylation Quantification Kit（M6A RNA甲基化定量檢測試劑盒）。

試劑盒原理

P-9005使用獨家配方試劑使RNA被高效的結合吸附在微孔板上。使用特異性捕獲 N6-甲基腺苷抗體和檢測抗體檢測 N6-甲基腺苷 (m6A)。檢測到的信號得到增強，然后通過讀取微孔板分光光度計中 450 nm 波長的吸光度進行比色定量。m6A 的量與測得的 OD 強度成正比。

P-9005-中文說明書鏈接

常見問題解答

在使用P-9005試劑盒的過程中，客戶往往會提出各種問題，小艾這里整理了一下常見的四大類FAQ。

一、實驗樣品類

1.試劑盒樣品有沒有種屬限制？

解答：P-9005試劑盒沒有種屬限制，但是需要是提取好的RNA樣品。

2.RNA樣品純度要求和輸入量？

解答：RNA純度要求：A260/280>1.9；A260/230>1.7。無DNA污染；另外RNA序列長度大于80nts，以便RNA可以較好的結合在板上。

RNA輸入量：對于每次實驗RNA的輸入量是100-300ng。最為理想的RNA的輸入量應該是200ng，正如我們所知m6A通常不到總RNA的0.1%。

二、試劑盒類

1.有效期是多久？

解答：客戶收到貨后，有效期6個月。

2.P-9005試劑盒里的組分是否可以單獨購買嗎?

解答：可以單獨購買，但是建議客戶購買完整試劑盒。

3.在Date Sheet中，它沒有告訴我們應該使用什么樣的材料來避免RNase，RNase是否會影響這個試劑盒的結果？

解答：實驗中涉及到的試劑都是不含RNase的，而且當RNA結合在板上后，RNase將不會再影響實驗結果。

4.客戶的緩沖液是50mM的PH8的tris-鹽酸緩沖液，可以用這個緩沖液分裝嗎？

解答：盡量推薦使用與廠家相同配方的溶液進行分裝。其他溶度的緩沖液是否可用，需要客戶自行嘗試。

三、產品說明書類

1.試劑盒孔板數指的是可以檢測的樣品數量嗎？

解答：48/96孔試劑盒只能做48/96個test，而不是48/96個樣品。相應的試劑會比48孔稍微多一點，因為要考慮到加樣損耗的因素。

2.加樣時RNA樣品體積多少合適？

解答：在與RNA的結合過程中，建議的200ngRNA的樣本量體積在1-8uL，這樣才能保證最佳的結合效率。

3.抗體稀釋比例是多少？

解答：CA和DA的原始濃度都是1000X，但是稀釋倍數不同，CA按照1：1000稀釋，DA按照1：2000稀釋，加大DA的稀釋比例降低背景信號。

4.P-9005做m6A甲基化的話，為什么要用帶濾芯的槍頭？還有在第4步，m6A RNA捕獲時，洗滌的操作溶液是直接用槍頭吸掉呢，還是可以直接倒掉？

解答：這里使用帶濾芯槍頭，目的是最大限度避免移液器帶來的交叉污染。如果客戶操作無誤，用普通槍頭也是可以的；使用手動移液器代替典型的板輕拂/傾倒方法，以確保完全去除緩沖液并最大程度減少孔間污染。注意，將移液槍沿孔的一側慢慢向底部引導，避免刮擦到孔底表面。

5.加入80ul的結合液后，再加入RNA，孵育90min后，將BS移除，這時候RNA在哪？

解答：RNA被高效RNA結合液結合在孔板底表面。八聯管孔底表面有預涂處理，帶正電，RNA的磷酸骨架帶負電，在BS結合液（Binding Solution）的作用下，帶負電的RNA可以穩定的結合在板上。

艾美捷科技（AmyJet Scientific）作為一家具有高端的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業，總部位于武漢光谷高新技術開發區，服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品、整合的解決方案，及優質的物流服務。為了更好的服務客戶，公司組建了一支經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心，進入研發生產階段，將更優質的產品推薦給國內生物領域的同仁們!

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商優保持著密切的合作關系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、BioVendor、Caisson Labs、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC等，可以在短時間內為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品及物流服務。