表觀遺傳之RNA甲基化——m6A甲基化

       大家小長假或者放假在家，沒事應該都會刷刷電視劇，來消磨時間....啊不對，是放松身心，讓我們的身體通過娛樂獲得滿滿的能量~~ 不過呢，我們娛樂完了要開始學習啦，今天我們繼續給大家放送表觀遺傳相關的產品，前面兩集是關于表觀遺傳之DNA甲基化的，今天給大家帶來表觀遺傳之RNA甲基化。

      前面給大家講了DNA甲基化，DNA甲基化是通過DNA甲基轉移酶在胞嘧啶環的第5個碳原子上共價加成甲基而產生的，從而產生5-甲基胞嘧啶（5-mC）。那么什么又是RNA甲基化呢？

       一 RNA甲基化相關概念

      RNA甲基化是RNA的可逆翻譯后修飾，其表觀遺傳地影響許多生物過程。它發生在不同的RNA中，包括tRNA，rRNA，mRNA，tmRNA，snRNA，snoRNA，miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基轉移酶具備相應的催化策略，用于RNA甲基化。

      RNA甲基化主要的修飾類型有兩三種：一種是6-甲基腺嘌呤（m6A），是在存在于真核生物的RNA分子中最常見的和豐富的甲基化修飾和占所有RNA甲基化的80％以上。它可以被稱為“第五RNA堿基”并且在調節胚胎發育和細胞命運中具有廣泛的作用。

      另一種是5-mC，5-甲基胞嘧啶（5-mC）是一種表觀遺傳標記，通常也出現在各種RNA分子中。有證據表明，RNA胞嘧啶甲基化會影響各種生物學過程，例如RNA穩定性和mRNA翻譯。

      最后一種是m1A RNA甲基化，它普遍存在于非編碼RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能，目前發現tRNA上發生多種m1A修飾，可能參與翻譯調控。

      今天就跟大家講講RNA m6A甲基化。

       二 m6A甲基化

      N6-甲基腺苷（m6A）-真核生物中存在的RNA分子中最常見和最豐富的甲基化修飾。 被稱為“第五個RNA堿基”的m6A RNA修飾是可逆的，高度動態的，并且可能起著與DNA甲基化和組蛋白修飾相當的重要生物學作用。

      Epigentek可提供m6A研究相關的產品，主要有m6A RNA定量試劑盒，甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制劑分析試劑盒，以及相關的抗體。

【操作指南】m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（cat#P-9005）

      【1】m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒

      【2】Epigenase m6A甲基酶活性/抑制分析試劑盒

      【3】m6A RNA甲基化抗體

      圖左：The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis

      圖右ELISA performed at1:1000 dilution usingN6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody

      圖左：The m6A rabbit monoclonal antibody was tested in Dot Blot against N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.

      Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG

      Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG

      Oligomer 10 -AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.

      圖右：U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 °C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4’, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.

      【4】MeRIP & m6A-seq產品

      通過富集存在少量m6A的部分基因組來鑒定m6A修飾。 然后通過構建文庫，為下一代測序準備這些片段。 我們獨特的方法稱為CUT＆RUN RNA m6A富集（在目標下切割，并使用核酸酶富集RNA m6A進行回收），僅在抗體結合位置分離RNA片段，同時在目標下捕獲和切割。 這種簡化的過程僅需幾個小時即可將RNA提取到cDNA文庫。

      p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit ：基于CUT＆RUN的MeRIP可提高特異性和信號。

      p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit：基于CUT＆RUN的一體式MeRIP和NGS庫準備。

      參考文獻：

      Tsuruta K. et. al. et. al. (September 2020). RNA N6-methyladenosine demethylase FTO regulates PD-L1 expression in colon cancer cellsBiochemical and Biophysical Research Communications. 530(1)  p-9005

      Zeng M et. al. (August 2020). Critical roles of mRNA m⁶A modification and YTHDC2 expression for meiotic initiation and progression in female germ cells. 753:144810. p-9008

      以上就是今天的全部內容了啦~~

      下期預告：RNA甲基化——5mC甲基化，大家敬請期待噢~~

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