如何定量檢測目的基因甲基化水平

今天我給大家來嘮嘮關于目的基因甲基化檢測方面（m6A、 5mC和5hmC）的產品搭配，不過我的搭配也只是一種可能的選擇（不過也有文章報道過我說的方式），所以我今天也只是給大家推薦推薦，看看能不能給小伙伴們的研究帶來一種思路，如果小伙伴覺得可行，可以咨詢小艾進行產品問詢，如果您覺得不可行，也歡迎各位小伙伴批評指正哦~~

具體事情是這樣的，最近收到很多小伙伴的問詢，比如：

“我想要檢測xxx基因的5mC甲基化水平，請問用您們的Epigentek p-1030試劑盒可以檢測嗎？”

“我想要檢測xxx基因的5hmC甲基化水平，用您們的Epigentek的p-1032可以檢測嗎？”

“請問用p-9005可以檢測xxx基因的m6A水平嗎？”……

但是呢，上述說的3個試劑盒p-1030、p-1032和p-9005都是用來檢測總體水平的5mC、5hmC和m6A的量，不能檢測單個基因的。

這么回復之后，有小伙伴又問：“我是不是可以自己購買特定目標基因的抗體用這個試劑盒進行檢測呢？比如我要檢測A基因的甲基化，我去購買A基因的抗體，搭配這個試劑盒檢測可以嗎？”

RE： 不可以哦，這個試劑盒里面的抗體是專門針對這些修飾位點進行設計的，也是經過廠家驗證能夠匹配整個試劑盒使用的，所以如果您用自己的抗體來進行實驗，很可能是檢測不到的呢。如果您能提取單個基因的DNA或者RNA樣本，倒是可以用這些試劑盒檢測。不過有點難呢，當然客戶可以自行嘗試~~

“那有可以檢測單個基因的產品推薦嗎？我不要檢測總的，就要檢測單基因的。”

相信有很多小伙伴對這方面很感興趣。接下來我們就大家說說我“建議”的思路。

1.如何定量檢測A基因的DNA 5mC甲基化水平？

關于DNA 5mC甲基化水平的檢測，如果是檢測總的，那很好辦，一個p-1030或者p-1034就可以搞定，簡單快捷，結果還好看。但是針對特定基因的話，就不能用這個產品了。我這邊的思路主要2個：

【1】關于特異基因的甲基化修飾檢測我想大家有個先入為主的概念就是MSP或者BSP。BSP是甲基化檢測的金標準，不過我今天就不細說了。主要說說MSP—甲基化特異性PCR。MSP的實驗過程簡單來說就是提取樣本中的DNA進行亞硫酸鹽轉換，最后將轉換的DNA進行定量PCR，由此來確定特異基因甲基化修飾。

產品搭配：

產品轉換流程和結果展示：

【2】IP。IP是個非常常用的技術手段，幾乎聽到IP大家都能知道這是干啥的。不過大家也有個先入為主的概念，就是IP只能下拉蛋白，是不是？IP抗體+磁珠，下拉下來的不就是蛋白嘛！但是，我們的IP試劑盒產品是可以下拉DNA和RNA的。我們現在需要的是含有5mC的DNA對吧？我們有專門的IP試劑盒下拉所有含有5mC的DNA。

產品搭配方案：

產品富集流程+結果展示：

2.如何定量檢測A基因的 5hmC甲基化水平？

關于DNA羥甲基化的定量檢測，我們檢測總的話就是p-1032，基于ELISA的方法，可進行絕對的定量。而特異基因的5hmC檢測參照的方式與5mC的一樣，也是先IP下來所有的5hmC DNA，再進行定量檢測。

產品搭配：

產品富集流程+結果展示：

3.如何定量檢測A基因的 RNA m6A甲基化水平？

檢測總的RNA m6A的量我們常用的是p-9005，而且這個產品我們賣的非?；穑徺I的人也非常的多，同時參考文獻也很多，我們是有現貨的。所以因為這個產品好用名氣大，所以很多小伙伴想用這個試劑盒來檢測單個基因的m6A的量。但是，這個產品也不能檢測單個基因的RNA m6A的量。所以，至于如何進行單個基因的，我推薦的思路與前面DNA的5mC和5hmC是一樣的。也是先進行IP，再進行PCR實驗，這里就多了一步反轉錄。

產品搭配：

產品富集流程+結果展示：

當然，我們的產品不止我提到的這些，還有其他的產品可供選擇，大家若是感興趣，可以咨詢小艾喲~~~

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