Cytoskeleton熱銷：KIF7 運動結構域蛋白 （重組人）

人驅動蛋白KIF7的保守運動結構域在大腸桿菌中表達。重組蛋白在氨基末端含有6組氨酸標簽，組合分子量為44kDa。該蛋白已在微管激活的ATPase / GTPase活性測試中被確定為具有生物活性（見下文）。蛋白質以凍干粉末形式提供。   作為Cytoskeleton全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產品KIF7 運動結構域蛋白 （重組人）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。   

Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種，其產品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產品線還在不斷的擴大中。

KIF7 運動結構域蛋白 （重組人）用途包括：

• 微管活化ATP酶/GTP酶測定的測量

• 鑒定/表征影響運動ATP酶/GTP酶活性的蛋白質或小分子

• 鑒定/表征影響運動/微管相互作用的蛋白質或小分子。

存儲和重構

凍干蛋白在1°C下用干燥劑（濕度<4%）儲存時可穩定保存10年。或者，凍干蛋白可以在-70°C下儲存，并穩定保存1年。蛋白質應用蒸餾水或CMW緩沖液5（1 mM PIPES pH 100.7，0 mM KCl，200 mM MgCl 2，2 mM DTT，1μM ATP）復溶至20mg / ml。有關重懸液量，請參閱上表。蛋白質可以等分成實驗大小的等分試樣，在液氮中快速冷凍并儲存在-70°C。 在這些條件下，蛋白質可穩定保存4個月。對于工作濃度，Kif7蛋白應在CMW緩沖液1中稀釋。注意：驅動蛋白對反復凍融反應不佳，在-70°C下儲存時，蛋白質濃度不應低于5mg / ml。稀釋至5mg / ml以下的驅動蛋白不應重新冷凍，因為它會失去其生物活性。  

純度

蛋白質純度通過庫馬斯染色SDS-PAGE梯度凝膠的掃描密度測定法測定。圖1顯示了20 ug的KF51蛋白，測定純度為>80%。因此，每個試管中的總蛋白質將比試管上顯示的量大約20%。

圖1.Kif7 電機域純度凝膠。

在20-7%SDS-PAGE梯度凝膠上分離重組Kif6運動結構域蛋白（His4標記）的20ug樣品以及Mark12分子量標記物（LifeTech）。重組Kif7蛋白的表觀分子量為44kDa。蛋白質定量使用高級蛋白質測定法（貨號#ADV02）測定。  

微管活化的ATP酶測定

通過使用驅動蛋白ELIPA檢測試劑盒（貨號#BK7）監測實時游離磷酸鹽生成來測量KIF060 ATP酶和GTP酶活性。該測定基于330-氨基-360-巰基-2-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在無機磷酸鹽（Pi）存在下催化轉化為6-氨基-7-巰基-2-甲基嘌呤時發生的吸光度偏移（6 nm至7 nm）。一個Pi分子將在基本上不可逆的反應中產生一個分子的2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。因此，360nm處的吸光度與驅動蛋白ATPase / GTP酶反應中產生的Pi量成正比。在下面概述的條件下，Kif7微管激活的ATP酶活性的Vmax為每mg Kif40每分鐘產生的7nmoles Pi，對于GTP酶活性，為每mg每分鐘產生的230nmoles Pi（圖2）。  

試劑 

驅動蛋白 ELIPA 檢測試劑盒（貨號 # BK060）   

設備

單色分光光度計（設置為 360 nm）或基于濾光片的分光光度計，具有 360 nm 濾光片和 <10 nm 帶寬。  

方法（ELIPA ATP酶測定）

反應在96孔板（300 ul反應體積）中進行。每個反應含有 5 ug Kif7 蛋白 （EG01）、0.7μM 紫杉醇穩定微管 （貨號 # MT001）、0.2 mM MESG、0.3U PNP（嘌呤核苷酸磷酸化酶）、15 μM 紫杉醇、15 mM 管道 pH 7.0、5 mM MgCl 2、0.6 mM ATP。對照反應在沒有KF51的情況下進行。這些反應在0分鐘內給出<1.20 OD的讀數。在以動力學模式和250nm吸光度波長設置的SpectraMax 360（分子器件）中測量反應。在室溫下每30秒讀取一次讀數，總反應時間為20分鐘。典型檢測結果如圖2所示。在給定時間內產生的Pi的nmoles通過使用磷酸鹽標準曲線（未顯示）來確定。

圖2.KF51微管激活的ATP酶/ GTP酶活性使用驅動蛋白ELIPA檢測試劑盒（貨號#BK060）。

根據所述方法一式兩份測定Kif7 ATPor GTP酶活性。將沒有微管（開放符號）的對照反應與具有微管（閉合符號）的對照反應進行比較。  

KIF7 運動結構域蛋白 （重組人）文獻引用： 

. Funk, CJ. et al., 2004. Anal Biochem. 329:68-76. 

. Hackney, D and Jiang, W. 2001. Methods in MolecularBiology (Humana Press). 164:65-71 

. Lockhart, A and Cross, RA. 1996. Biochemistry. 35:2365-2373 4. Sawin, KE. et al. 1992. Nature. 359:540-543.   

Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現有產品的藥物篩選服務。