Life Diagnostics：羊駝觸珠蛋白酶聯免疫吸附試驗解決方案

觸珠蛋白是一種急性期蛋白，在感染和炎癥期間，大多數哺乳動物的血液中都會升高。Passler等人報告稱，暴露于脂多糖后，羊駝的血清觸珠蛋白水平會升高，從而誘導急性期反應。

該檢測使用親和純化的羊駝觸珠蛋白抗體進行固相（微量滴定孔）固定，使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的羊駝接觸珠蛋白抗體檢測。標準品和稀釋樣品在微量滴定孔中孵育45分鐘。隨后清洗這些井。加入HRP綴合物并孵育45分鐘。這導致觸珠蛋白分子被夾在固定化抗體和檢測抗體之間。然后洗滌孔以去除未結合的HRP綴合物，加入TMB并孵育20分鐘。如果存在觸珠蛋白，則會出現藍色。通過加入Stop溶液停止顯色，使顏色變為黃色，并在450nm處測量吸光度。觸珠蛋白的濃度與吸光度成正比，由標準曲線得出。

艾美捷Life Diagnostics試劑盒提供的材料和組分：

包被血紅蛋白抗體的96孔板（12條8孔條）

辣根過氧化物酶結合物，11毫升

血紅蛋白標準品（凍干）

20倍洗滌液；TBS50-20，50毫升

10倍稀釋液；YD25-10，25毫升

四甲基聯苯胺（TMB），TMB11-1，11毫升

終止液，SS11-1，11毫升

未提供但必需的材料：

移液器和吸頭

蒸餾水或去離子水

聚丙烯或玻璃試管

渦旋混合器

吸水紙或紙巾

板式孵育器/振蕩器

板式洗板機

能夠測量450納米吸光度的板式閱讀器

曲線擬合軟件

儲存：

未開封的試劑盒應存放在2-8°C，微孔板應存放在密封袋中，并放入干燥劑。試劑盒自購買之日起六個月內保持穩定。

一般指導：

所有試劑在使用前應放置至室溫。

當對指導有完全理解并遵循良好的實驗室操作時，將獲得可靠和可重復的結果。

洗滌程序至關重要。洗滌不充分會導致精度差和吸光度讀數虛高。

實驗室溫度會影響吸光度讀數。我們的ELISA試劑盒使用設置在150轉/分鐘和25°C的振蕩孵育器進行校準。在更低溫度下進行檢測將導致吸光度值降低。

稀釋液準備：

稀釋液作為10倍濃縮液提供。使用前，估算實驗所需的最終稀釋液體積，并將10倍濃縮液與九倍蒸餾水或去離子水混合稀釋。

洗滌液準備：

洗滌液作為20倍濃縮液提供。使用前，將瓶中內容物（50毫升）與950毫升蒸餾水或去離子水混合稀釋。

標準品準備：

按照瓶簽上的說明重新溶解凍干的標準品。重新溶解的標準品在4°C下穩定一天，但如果打算將來使用，應分裝并存放在-20°C或更低的溫度下。

標記6個聚丙烯或玻璃試管：200、100、50、25、12.5、6.25 ng/ml。

在標記為200 ng/ml的試管中，根據標準品瓶簽上的詳細說明準備200 ng/ml的標準品。

在標記為100、50、25、12.5、6.25 ng/ml的試管中分別加入250 ?l的稀釋液。

通過將標記為100 ng/ml的試管中的250 ?l 200 ng/ml標準品與250 ?l稀釋液混合稀釋，準備100 ng/ml的標準品。

類似地，通過兩倍連續稀釋準備其余的標準品。

樣品準備：

我們發現健康羊駝血清中的血紅蛋白水平大約為4 mg/ml。為了獲得在標準曲線范圍內的值，我們建議使用以下程序將每個待測樣品稀釋16,000倍：

分別向試管中加入198 ?l和636 ?l的1x稀釋液。

將2.0 ?l的血清/血漿樣品吸入含有198 ?l 1x稀釋液的試管中并混合。這提供了100倍的稀釋。

將4.0 ?l的100倍稀釋樣品與第二管中的636 ?l 1x稀釋液混合。這提供了樣品的16,000倍稀釋

典型標準曲線：

以下顯示了一個典型的標準曲線，以450納米處的吸光度作為Y軸，相對于X軸上的血紅蛋白濃度。這個曲線僅用于說明。

參考文獻：

1. Passler T. et al., Evaluation of methods to improve the diagnosisof systemic inflammation in alpacas. J Vet Intern Med. 27:970-976 (2013).

Life Diagnostics 專注于研發和生產臨床前研究以及動物醫學診斷相關的ELISA試劑盒、純化的生物標志物和抗體等產品。產品覆蓋心血管疾病、急性期反應、免疫毒性和免疫學標志物等研究領域，主要應用于小鼠、大鼠、兔、貓、狗、豬、猴和雞等物種。艾美捷科技是Life Diagnostics的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。