透析？調pH？GST融合蛋白包涵體增溶復性方案！

還在做漫長的透析，調pH...想要表達生產點GST融合蛋白，怎么就這么難？

眾所周知，GST標簽是由211個氨基酸組成，大小約為26KDa，作為一種高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性，提高表達量，而被廣泛應用于重組蛋白表達以及親和純化實驗中。盡管有這些優點，但GST標簽融合蛋白依舊無法避開包涵體的噩夢！

Fig.1 常規包涵體蛋白復性過程

如何擊破GST融合蛋白包涵體的問題，目前常規的的常規流程是：收菌破碎--洗滌--變性溶解（尿素等）--復性。而復性板塊中的稀釋和透析不僅慢，而且無法滿足大規模的蛋白生產需求。

作為專業的生命科學醫藥原料供應商，艾美捷科技為您推薦：專為GST融合蛋白高效高溶解性而設計的產品，GST包涵體快速溶解與復性試劑盒！

快速GST包涵體增溶和復性試劑盒旨在在裂解和提取程序后以可溶性形式回收表達的GST融合蛋白。 每個試劑盒均包含足以溶解和復性多達5-10L細菌培養物的試劑。

*** 該產品僅用于科研實驗.

• GST包涵體快速溶解與復性試劑盒的優勢：

1.專為GST包涵體設計和優化

2.節省時間：無需冗長的透析或稀釋步驟，僅需2h

3.使用便捷：不涉及pH值變化和氧化還原

4.大規模生產：每個Kit滿足5-10 L的細菌培養液

Fig.2 GST包涵體快速溶解與復性試劑盒-實驗流程

Fig.3 GST包涵體快速溶解與復性試劑盒-結果展示

• Cell文章鑒賞：

Campion, Carole G et al. "COMMD5/HCaRG Hooks Endosomes on Cytoskeleton and Coordinates EGFR Trafficking". Cell reports vol. 24,3 (2018): 670-684.e7. doi:10.1016/j.celrep.2018.06.056

【摘要】COMMD5/HCaRG 參與組織修復，其低表達與致瘤性有關。細胞生長、遷移和分化由 COMMD5 控制。我們之前報道過 COMMD5 通過調節 ErbB 成員的表達或磷酸化來抑制腎癌細胞的生長。在這里，我們證明 COMMD5 對細胞骨架的穩定性至關重要。它的沉默導致肌動蛋白和微管網絡的重大重組。 COMMD5 的 N 末端與內體 Rab5 結合，其 C 末端（包括 COMMD 結構域）與細胞骨架支架結合。 COMMD5 參與長程內體轉運，包括表皮生長因子受體 (EGFR) 再循環，并提供變形的強度并協助囊泡斷裂成分選內體。該研究建立了 COMMD5 作為銜接蛋白協調內體運輸的分子機制，并揭示了其在 EGFR 運輸和活性中的重要作用。

已發表文章：

• Gao, Q. et al. (2019). Purification of insoluble GST-fused and GST-cleaved Cav1.2 channel fragment by denaturation and renaturation. Protein Expr Purif. 160:7-10. doi: 10.1016/j.pep.2019.03.013.

• Campion, C.G. et al. (2018). COMMD5/HCaRG Hooks Endosomes on Cytoskeleton and Coordinates EGFR Trafficking. Cell Rep. 24(3):670-684.e7. doi: 10.1016/j.celrep.2018.06.056.

• Wang, H. et al. (2017). Truncated protein tyrosine phosphatase receptor type O suppresses AKT signaling through IQ motif containing GTPase activating protein 1 and confers sensitivity to bortezomib in multiple myeloma. Oncotarget. 8(69):113858-113873. doi: 10.18632/oncotarget.23017.

• Hamel, V. et al. (2017). Identification of Chlamydomonas Central Core Centriolar Proteins Reveals a Role for Human WDR90 in Ciliogenesis. Curr Biol. 27(16):2486-2498.e6. doi: 10.1016/j.cub.2017.07.011.

• Dixon, J. E. et al. (2016). Highly efficient delivery of functional cargoes by the synergistic effect of GAG binding motifs and cell-penetrating peptides. Proc Natl Acad Sci U S A. 113:E291-E299.

• Matsuoka, T. et al. (2014). Expression and characterization of honeybee, Apis mellifera, larva chymotrypsin-like protease. Apidologie. doi:10.1007/s13592-014-0313-2.

• Keller, D. et al. (2014). Mechanisms of HsSAS-6 assembly promoting centriole formation in human cells. J. Cell Biol. 204:697-712.

• Lalani, S. et al. (2013). MCTP2 is a Dosage-Sensitive Gene Required for Cardiac Outflow Tract Development. Hum. Mol. Genet. 10.1093/hmg/ddt283.

• Sabbah, M. et al. (2011). CCN5, A Novel Transcriptional Repressor of Transforming Growth Factor- Signaling Pathway. Mol. Cell. Biol. 10.1128/MCB.01316-10.

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