Abbexa丨艾美捷代理鼠源D-Dimer ELISA試劑盒說明書

一、產品概述

D - Dimer 是一種由纖維蛋白的兩個D片段通過交聯形成的蛋白質，它是血液凝塊在纖溶過程中被降解產生的一種纖維蛋白降解產物（FDP）。在醫學領域，D - Dimer 對于診斷彌漫性血管內凝血（一種血液疾病）以及深靜脈血栓等病癥具有重要的臨床意義。本試劑盒專為定量檢測小鼠血漿中的纖維蛋白原 D - Dimer 蛋白而設計，適用于小鼠樣本的檢測。艾美捷作為Abbexa中國區代理商，為大家整理了一份鼠源D-Dimer ELISA試劑盒中文說明書。

二、Abbexa鼠源D-Dimer ELISA試劑盒（abx258705）組成：

本試劑盒基于競爭性酶聯免疫吸附測定（ELISA）技術原理。其核心組成如下：

預包被的 96 孔微孔板：預先包被有特異性抗體，用于捕獲樣本中的 D - Dimer。

標準品：用于建立標準曲線，以定量分析樣本中的 D - Dimer 含量。

標準品稀釋緩沖液：用于稀釋標準品溶液，以獲得不同濃度的標準系列。

洗滌緩沖液：用于在各步驟中清洗微孔板，去除未結合的成分，減少背景干擾。

檢測試劑 A：生物素標記的試劑，參與競爭反應。

檢測試劑 B：辣根過氧化物酶（HRP）標記的試劑，用于信號放大。

稀釋液 A 和稀釋液 B：分別用于稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B，確保其在合適的工作濃度下發揮作用。

TMB 底物：用于顯色反應，其顏色變化與 D - Dimer 的含量呈反比關系。

終止液：用于終止反應，使顏色變化固定，便于在特定波長下測量吸光度。

封板膜：用于在反應過程中封閉微孔板，防止蒸發和交叉污染。

此外，進行實驗還需要準備一些未提供的材料，如 37℃恒溫箱、多道和單道移液管及無菌移液頭、洗瓶或自動微孔板清洗器、1.5ml 離心管、蒸餾水、吸水濾紙、100ml 和 1 升量筒、微孔板讀數儀（波長：450nm）以及 ELISA 振蕩器。

三、實驗原理

本試劑盒采用競爭性 ELISA 技術。預先在 96 孔板上包被有特異性抗體。將標準品、測試樣本和生物素偶聯試劑加入到孔中并孵育，生物素標記的 D - Dimer 與未標記的 D - Dimer 之間會在預包被抗體上發生競爭性抑制反應。隨后加入 HRP 偶聯試劑，并再次孵育。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的偶聯物。使用 TMB 底物來定量 HRP 酶促反應。加入 TMB 底物后，只有含有足夠 D - Dimer 的孔才會產生藍色產物，加入酸性終止液后會變為黃色。黃色的強度與結合在板上的 D - Dimer 量成反比。在微孔板讀數儀上以 450nm 波長光譜光度法測量 OD 值，從而可以計算出 D - Dimer 的濃度。

四、試劑準備

1.標準品：按照說明書推薦的體積，用標準品稀釋緩沖液配制標準品溶液。然后按照協議中的指示，使用標準品稀釋緩沖液對標準品溶液進行連續稀釋。

2.洗滌緩沖液：按照協議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3.檢測試劑準備：計算所需的工作溶液體積。分別用稀釋液 A 和稀釋液 B 按 1：100 的比例稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

五、實驗步驟

1.設置標準、測試樣本和對照孔：在預包被的微孔板上分別設置標準孔、測試樣本孔和對照（零）孔，并記錄它們的位置。建議每個標準和樣本至少進行雙份測量。

2.加樣：向標準孔中加入 50uL 稀釋后的標準品，向對照（零）孔中加入 50uL 標準品稀釋緩沖液，向樣本孔中加入 50uL 稀釋后的樣本。

3.加入檢測試劑 A：立即向每個孔中加入 50uL 檢測試劑 A 工作溶液。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 1 小時。

4.洗滌：移除封板膜，棄去溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌微孔板 3 次。

5.加入檢測試劑 B：向每個孔中加入 100uL 檢測試劑 B 工作溶液，封板后在 37℃下孵育 30 分鐘。

6.再次洗滌：棄去溶液，用洗滌緩沖液按前一步驟所述方法洗滌微孔板 5 次。

7.加入 TMB 底物：向每個孔中加入 90uL TMB 底物。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 10 - 20 分鐘。避免光照。孵育時間僅供參考，最佳時間應由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

8.加入終止液：向每個孔中加入 50uL 終止液。立即在 450nm 波長下讀取吸光度。

六、結果計算

本實驗為競爭性實驗，因此樣本中 D - Dimer 的濃度與其測量的吸光度呈反比關系。創建一個以標準濃度的對數（y 軸）和平均吸光度（x 軸）為坐標的圖表。通過標準點繪制最佳擬合趨勢線?？梢詮臉藴是€上插值計算出樣本中 D - Dimer 的濃度。

七、實驗精密度

1.批內精密度（同一批次內的精密度）：對低、中、高三個水平的 D - Dimer 樣本進行 20 次測試，均在同一塊微孔板上進行。變異系數（CV%）=（標準差/平均值）× 100。批內精密度：CV < 10%。

2.批間精密度（不同批次之間的精密度）：對低、中、高三個水平的 D - Dimer 樣本在 3 塊不同的微孔板上進行測試，每塊微孔板上各有 8 個重復樣本。批間精密度：CV < 12%。

八、注意事項

1.僅用于研究目的：本產品僅供研究使用，不得用于診斷或治療用途。

2.范圍和靈敏度可能發生變化：范圍和靈敏度可能會發生變化。

3.樣本濃度要求：為獲得準確結果，樣本濃度必須稀釋至試劑盒的中等范圍內。

4.樣本類型優化：請注意，Abbexa的試劑盒針對天然樣本的檢測進行了優化，而不是重組蛋白。Abbexa無法保證檢測重組蛋白，因為它們可能具有與天然蛋白不同的序列或三級結構。

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