LifeSensors丨艾美捷基于凝膠的可定制體外E3泛素連接酶活性試劑盒（Alexa647）

UC201試劑盒是一種基于凝膠的體外泛素化試劑盒，旨在為研究人員提供一種簡單、快速的實驗方法。該試劑盒利用熒光標記的泛素-Alexa647進行E3連接酶活性檢測，并通過SDS-PAGE凝膠電泳分離，使研究人員能夠直接可視化和定量分析凝膠結果，從而節省寶貴的時間和試劑。與傳統的基于Western blot的E3連接酶活性檢測方法相比，該試劑盒操作更為簡便，耗時更短。艾美捷作為LifeSensors的獨家代理商，將詳細介紹：

編號：UC-0201

分類：E1-E2-E3活性檢測、試劑盒與平板、研究試劑盒

概述：

泛素是一種小分子（約8.6 kDa）多肽，能夠通過其C末端與目標蛋白上的賴氨酸殘基的氨基發生共價結合，這種結合過程被稱為單泛素化。此外，還可以通過泛素分子上存在的七個賴氨酸殘基中的任何一個，將更多的泛素分子連接到初始泛素上，形成泛素鏈，這一過程被稱為多泛素化。其中，通過泛素分子上第48位賴氨酸（K48）形成的泛素鏈是最為人們所熟知的。單泛素化已被證明可以改變目標蛋白的定位、活性和/或功能。而多泛素化最常見的結果是通過蛋白酶體介導的目標蛋白降解。泛素與目標蛋白的結合需要三種不同酶的協同作用，即E1（泛素激活酶）、E2（泛素結合酶）和E3（泛素連接酶），最終在泛素的C末端與目標蛋白上的賴氨酸殘基的ε-氨基之間形成異肽鍵。泛素E3連接酶作為支架蛋白，為泛素結合酶（E2）和目標底物提供結合位點。通常情況下，E3連接酶介導泛素從E2硫酯中間體轉移到目標蛋白的酰胺鍵上（Hershko和Ciechanover，1998）。除了對底物進行泛素化外，E3連接酶還可以自身泛素化。這一特性被用于體外實驗中，以監測E3連接酶的活性。本試劑盒基于凝膠的體外泛素化實驗，操作簡單、快速且易于使用。E3連接酶實驗采用熒光標記的泛素-Alexa647進行，并通過SDS-PAGE凝膠電泳分離，使研究人員能夠直接可視化和定量分析凝膠結果，從而節省寶貴的時間和試劑。與傳統的基于Western blot的E3連接酶活性檢測方法相比，該試劑盒操作更為簡便，耗時更短。

LifeSensors基于凝膠的可定制體外E3泛素連接酶活性試劑盒試劑盒組成：

10倍濃縮檢測緩沖液

可選E3連接酶

可選E2結合酶

泛素激活酶E1

泛素混合物

ATP

陽性對照E3與E2（Carp2與UBE2D3，20倍）

6倍SDS凝膠上樣緩沖液

注意事項：

儲存：所有組分應儲存于-80°C。

穩定性：除預涂平板外，所有組分在-80°C儲存時至少穩定2個月。平板必須在30天內使用。

重要提示：選擇合適的鏈霉親和素試劑對于產生強信號至關重要。不建議使用辣根過氧化物酶（HRP）結合的鏈霉親和素。

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