脂質提取試劑盒(無氯仿)檢測的典型結果分析

脂質是一類多樣化的分子，包括單酰甘油、二酰甘油、三酰甘油、脂肪、甾醇等。脂質不僅定義和維持細胞膜的完整性，還參與細胞過程，如膜運輸、信號轉導、細胞凋亡和能量儲存。脂質代謝的紊亂與多種疾病有關，如癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和冠心病。

為了研究脂質，通常需要首先從組織或培養細胞中提取它們。傳統上，Folch方法（參考文獻1）的有機提取是首選，但這種方法存在幾個缺點。首先，它將脂質提取到底部有機相中，在純化過程中，上層含蛋白質的相會穿透到底部，導致脂質樣本受到污染。因此，低純度的脂質樣本可能會因堵塞儀器（如高效液相色譜儀）而阻礙下游脂質分析。此外，Folch方法使用氯仿作為有機相溶劑。長期吸入氯仿會導致肝臟受損，如肝炎和黃疸。此外，氯仿已被證明在動物中具有致癌性，導致腎臟和肝臟腫瘤增加。事實上，美國環境保護署（EPA）已將氯仿歸類為B2組，可能的人類致癌物。

艾美捷脂質提取試劑盒(無氯仿)（#STA-612）通過有機提取分離總脂質，但通過將脂質提取到上層有機相（使其適用于高通量提取）并避免使用氯仿，從而避免了上述缺點。將粗脂質來源（如血清或組織培養細胞沉淀）重懸于專有的酒精中。加入專有的有機化合物后，混合物通過離心分離各相。回收的上層有機相隨后干燥并重懸，用于下游脂質分析。每套試劑盒提供足夠的試劑，可分離多達50個樣本（基于100 ?L樣本量）?？梢允褂酶蟮臉颖玖浚ㄒ姳?），但每套試劑盒的分離次數會相應減少。

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試劑盒組成（室溫運輸）：

1. 脂質提取試劑A（部件編號261201）：一瓶25 mL琥珀色玻璃瓶。

2. 脂質提取試劑B1（部件編號261204）：兩瓶30 mL琥珀色玻璃瓶。

3. 脂質提取試劑B2（部件編號261205）：一瓶20 mL琥珀色玻璃瓶。

4. 脂質提取試劑C（部件編號261203）：一瓶25 mL。

未提供材料：

1. 玻璃管、15 mL錐形管或微量離心管

2. 10 ?L至1000 ?L可調單通道移液器及一次性吸頭

3. 50 ?L至1000 ?L可調多通道移液器及一次性吸頭

4. 多通道移液器儲液槽

5. 磷酸鹽緩沖液（PBS）

6. 試管渦旋器

7. 有機溶劑（如氯仿、丁醇或環己烷）

儲存：

將整個試劑盒儲存于室溫。為避免可能的泄漏，請將瓶子直立存放。

試劑準備：

- 脂質提取試劑B：將3份脂質提取試劑B1與1份脂質提取試劑B2在琥珀色玻璃瓶中混合。充分混合后，保存于避光處，直至使用。

樣本準備：

- 血漿：用抗凝劑（如檸檬酸、EDTA、肝素或草酸鹽）收集血液，并通過翻轉混合。在4°C下以1000 x g離心10分鐘。收集血漿上清液，避免干擾白色白細胞層。樣本應立即提取，或在-80°C下保存。

- 血清：在無抗凝劑的試管中收集血液。讓血液在室溫下凝固30分鐘。以2500 x g離心20分鐘。小心移除黃色血清上清液，避免干擾白色白細胞層。樣本應立即提取，或在-80°C下保存。

- 培養細胞：將5-10×10?個細胞以1000 x g離心5分鐘。用1X PBS洗滌細胞一次，最后將細胞沉淀重懸于100 ?L 1X PBS中。按照試劑盒協議進行提取。

- 組織：小心地用手術刀/剃刀片將組織切成小塊，并在50 mL錐形管中稱重。加入PBS，使組織濃度達到2 mg/mL。在4°C下勻漿組織。按照試劑盒協議從全組織勻漿中進行提取。

結果示例：

以下圖表展示了使用脂質提取試劑盒制備的樣本進行的各種檢測的典型結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。

圖1：總膽固醇測定（產品編號STA-390）

(A) 膽固醇標準曲線。

(B) 使用Folch方法（藍色條）或無氯仿的脂質提取試劑盒（紅色條）從胎牛血清（FBS）或HEK293細胞中提取的脂質，根據檢測協議檢測膽固醇的存在。

圖2：游離脂肪酸測定（產品編號STA-619）

(A) 游離脂肪酸（FFA）標準曲線。

(B) 使用Folch方法（藍色條）或無氯仿的脂質提取試劑盒（紅色條）從胎牛血清（FBS）或HEK293細胞中提取的脂質，根據檢測協議檢測游離脂肪酸的存在。

脂質提取試劑盒(無氯仿)文獻參考：

1. Folch J, Lees M, and Slone Stanley GH (1956) J. Biol. Chem. 226, 497-509.

2. Iverson SJ, Lang SLC, and Cooper MH (2001) J. Lipid Res. 36, 1283-1287.

3. Bang DY, Byeon SK, Moon MH (2014) J. Chromatogr A. 28, 1331

4. Reis A, Rudnitskaya A, Blackburn GJ, Mohd Fauzi N, Pitt AR, Spickett CM (2013) J. Lipid Res.,

54, 1812-1824.