總膽固醇檢測試劑盒，適用于血清、血漿、細胞懸浮液和組織勻漿

總膽固醇檢測試劑盒(比色法)（#STA-384）測量血清、血漿、裂解物、或組織樣本。該測定基于酶驅動的反應，可量化膽固醇酯類和游離膽固醇。膽固醇酯通過膽固醇酯酶水解成膽固醇，然后被膽固醇氧化酶氧化成酮膽甾-4-烯-3-酮加氫過氧化物。然后用高度特異的比色探針檢測過氧化氫。辣根過氧化物酶催化探針與過氧化氫之間的反應，過氧化氫與辣根過氧化物酶結合1:1的比例。將樣品與96孔中已知濃度的膽固醇標準品進行比較微量滴定板格式。將樣品和標準品孵育45分鐘，然后用標準96孔比色板讀數器。

艾美捷總膽固醇檢測試劑盒(比色法)（#STA-384）組成：

盒子1（室溫運輸）：

1. 膽固醇標準品（部件編號239001）：一支50 ?L管，含10 mM乙醇溶液中的膽固醇。

2. 檢測稀釋液（5倍）（部件編號239002）：一瓶100 mL。

3. 50倍比色探針（部件編號238401）：一支200 ?L管，溶于DMSO中。

4. 辣根過氧化物酶（部件編號234402）：兩支100 ?L管，含100 U/mL甘油溶液中的辣根過氧化物酶。

總膽固醇檢測試劑盒(比色法)特點：

1、96孔比色或熒光檢測格式

2、檢測低至4?M（比色法）或0.2?M（熒光法）的濃度

3、適用于血清、血漿、細胞懸浮液和組織勻漿

4、α-酮戊二酸標準品用于未知樣品的定量

樣本準備：

樣本應立即進行檢測，或在檢測前儲存于-80?C。樣本的最佳實驗條件需由研究者自行確定。以下建議僅作為指導方針，可根據需要調整以優化或補充用戶的實驗設計。建議對樣本進行一系列稀釋，以獲得最佳的檢測結果并盡量減少可能的干擾物質。根據需要運行適當的對照組。始終與樣本一起運行標準曲線。高濃度的蛋白質可能會干擾檢測。在這種情況下，建議使用10kDa分子量截止（MWCO）的離心過濾器對樣本進行過濾，以減少蛋白質干擾和渾濁的可能性。

- 組織樣本：稱取500-1000 mg樣本，用剪刀和研缽將其剪碎并研磨，直至組織完全液化。加入2 mL 1X檢測緩沖液或PBS，然后在冰上對勻漿進行數次超聲處理。以12,000 x g離心10分鐘以去除雜質。收集上清液，并在另一個離心管中再次離心以進一步澄清。將上清液轉移到新的離心管中，并在冰上孵育。準備好用于檢測的樣本，并將剩余的上清液儲存于-80?C。在1X檢測緩沖液中進行進一步稀釋。

- 細胞懸浮液：將細胞制備成1x10?細胞/mL的濃度，并用0.2 mL冷PBS或1X檢測緩沖液快速勻漿細胞沉淀。以12,000 x g離心10分鐘以去除雜質。將上清液轉移到新的離心管中，并在冰上孵育。準備好用于檢測的樣本，并將剩余的上清液儲存于-80?C。在1X檢測緩沖液中進行進一步稀釋。

- 血清：采集血液時不要使用抗凝劑。讓血液在室溫下凝固30分鐘。在4?C下以2000 x g離心10分鐘。小心地移除血清層，并將其置于冰上。注意避免干擾白色的白細胞層。分裝樣本用于檢測，并將剩余溶液儲存于-80?C。在1X檢測緩沖液中進行血清稀釋。進行多次稀釋以確保數值在標準曲線范圍內。

- 血漿：使用肝素或檸檬酸（EDTA可能會導致猝滅效應）采集血液，并在4?C下以1000 x g離心10分鐘。小心地移除血漿層，并將其置于冰上。注意避免干擾白色的白細胞層。分裝樣本用于檢測，并將剩余溶液儲存于-80?C。在1X檢測緩沖液中進行血漿稀釋。進行多次稀釋以確保數值在標準曲線范圍內。

注意事項：

1. NADH濃度高于10 ?M和谷胱甘肽濃度高于50 ?M的樣本會氧化比色探針，可能導致錯誤的讀數。為了盡量減少這種干擾，建議在反應中加入超氧化物歧化酶（SOD），最終濃度為40 U/mL。

2. 避免使用含有DTT或β-巰基乙醇的樣本，因為比色探針在硫醇（高于10 ?M）存在時不穩定。

3. 比色探針在高pH（>8.5）條件下不穩定。

結果示例：

肝勻漿。在冷1X試驗中對雞肝進行均質化和超聲處理 緩沖器。離心后，根據測定方案對勻漿進行測試。

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總膽固醇檢測試劑盒(比色法)引用文獻：

Cappello, A. et al. (2022). Extracellular serine empowers epidermal proliferation and psoriasis-like symptoms. Sci Adv. 8(50):eabm7902. doi: 10.1126/sciadv.abm7902 (#MET-5131).