OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒，用于測定多種生物樣本中的8-iso-PGF2α水平

脂質過氧化是動物和植物細胞損傷的一個明確機制。脂質過氧化物是細胞氧化應激的不穩定指標，它們會分解形成更復雜且更具反應性的化合物，例如異前列腺素。異前列腺素是一種通過氧自由基誘導組織磷脂和脂蛋白的過氧化而產生的非酶促合成的二十烷類化合物。異前列腺素是類似前列腺素的化合物，正常情況下會出現在血漿和尿液樣本中，但在組織、血漿和尿液中，它們的水平會因氧化應激而升高。

8-異前列腺素F2α（也稱為8-表前列腺素F2α、8-異前列腺素或15-異前列腺素F2t）是一種已被證明可用于體內氧化應激評估的異前列腺素。它是由花生四烯酸衍生的非環氧化酶和環氧化酶過氧化途徑在膜磷脂中產生的。8-異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）是一種強效的血管收縮劑，也是3T3細胞和血管平滑肌細胞中的誘變劑，可能是一種能夠改變膜完整性的病理生理介質。它與動脈粥樣硬化的形成有關，其水平升高與肝腎綜合征、類風濕性關節炎、致癌作用以及動脈粥樣硬化有關。8-iso-PGF2α在血漿中循環，并通過尿液排出。8-iso-PGF2α以酯化低密度脂蛋白磷脂和游離酸的形式循環。正常人血漿和尿液中的8-iso-PGF2α水平分別約為40-100 pg/mL和約190 pg/mg肌酐。測定總8-iso-PGF2α的方法通常需要對組織中的8-iso-PGF2α酯進行堿水解，隨后進行提取、相分離和薄層色譜分析。

OxiSelect? 8-異前列腺素F2α ELISA試劑盒是一種用于快速檢測和定量8-iso-PGF2α的酶免疫分析方法。通過將樣本中的8-iso-PGF2α吸光度與已知8-iso-PGF2α標準曲線的吸光度進行比較，來確定樣本中8-iso-PGF2α的含量。每套試劑盒提供的試劑足以進行多達96次測定，包括標準曲線和未知樣本的測定。

艾美捷OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒（#STA-337）測定原理：

Cell Biolabs的8-iso-PGF2α試劑盒是一種競爭性酶聯免疫吸附測定（ELISA），用于測定血漿、尿液、血清或組織提取物等多種生物樣本中的8-iso-PGF2α水平。將抗8-iso-PGF2α抗體在預先包被的微孔板孔中孵育。洗滌后，將8-iso-PGF2α標準品或處理過的樣本與8-iso-PGF2α-HRP偶聯物混合，并同時加入孔中。未偶聯的（游離的）8-iso-PGF2α和8-iso-PGF2α-HRP偶聯物會競爭性地與結合在板上的抗體結合。經過短暫孵育和洗滌后，加入HRP底物。HRP活性導致的顏色變化與結合到板上的8-iso-PGF2α偶聯物的量成正比，與樣本或標準品中游離8-iso-PGF2α的量成反比。通過與已知的標準曲線進行比較，確定未知樣本中的8-iso-PGF2α含量。在進行測定之前，請仔細閱讀完整的試劑盒說明書。

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OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒組成：

1. 山羊抗兔抗體包被板（編號250001）：一個96孔條板。  

2. 抗8-iso-PGF2α抗體（編號233701）：一個20微升裝的抗8-iso-PGF2α兔IgG管。  

3. 樣本稀釋液（編號233702）：一個50毫升瓶。  

4. 中和液（編號233705）：一個20毫升瓶。  

5. 10倍洗滌緩沖液（編號310806）：一個100毫升瓶。  

6. 底物溶液（編號310807）：一個12毫升琥珀色瓶。  

7. 終止液（編號310808）：一個12毫升瓶。  

8. 8-iso-PGF2α標準品（編號233703）：一個25微升裝的200微克/毫升8-iso-PGF2α（溶于DMSO）管。  

9. 8-iso-PGF2α-HRP偶聯物（編號233704）：一個70微升裝的8-iso-PGF2α-HRP偶聯物管。

未提供的材料：

1. 蛋白質樣本，如純化蛋白、血漿、血清、細胞裂解液等。  

2. 去離子水。  

3. 樣本提取和純化所需的試劑和材料。

儲存條件：

- 收到后，將抗8-iso-PGF2α抗體、8-iso-PGF2α-HRP偶聯物和8-iso-PGF2α標準品儲存于-20攝氏度。根據需要分裝，以避免反復凍融。  

- 將試劑盒中的其他組分儲存于4攝氏度。  

- 任何部分使用或未使用的組分應恢復到適當的儲存溫度。

樣本準備：

為了測量游離和酯化的異前列腺素，需要對與脂蛋白或磷脂結合的8-異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）進行水解。為了水解這種酯鍵，通常用2N氫氧化鈉在45攝氏度下處理樣本2小時。

- 血清、血漿、組織裂解液樣本：使用1份10N氫氧化鈉處理4份液體樣本。在45攝氏度下孵育2小時后，每500微升水解樣本加入100微升濃（10N）鹽酸。加入后樣本可能會變渾濁。在微型離心機中以12,000轉/分鐘離心5分鐘。清澈的上清液可用于測定，或儲存于-20攝氏度或更低溫度以備后用。在測定前，請確保每個中和后的樣本pH值在6-8之間。如果不在該范圍內，通過將100微升樣本加入100微升提供的中和液中，將pH值調整到該范圍內。  

- 尿液樣本：在ELISA之前，需要對尿液樣本進行酸水解，以分解將脂質和非脂質成分結合在一起的鍵。通過加入1/10體積的1N鹽酸將尿液樣本酸化至pH 3.0（例如：向1毫升尿液樣本中加入100微升1N鹽酸）。酸化后的尿液樣本應在PBS或樣本稀釋液中進一步稀釋1:4至1:8，然后進行ELISA。

結果示例：

以下圖表展示了典型的8-iso-PGF2α結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。  

圖1：8-iso-PGF2α ELISA標準曲線  

圖2：用8-iso-PGF2α ELISA檢測的人尿液稀釋液

OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒文獻參考：

1. Banerjee, M., Kang, K.H., Morrow, J.D., et al. (1992) Am. J. Physiol. 263: H660-H663.

2. Morrow, J.D., Hill, K.E., Burk, R.F., et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 9383-9387.

3. Morrow, J.D., Harris, T.M., Roberts, L.J. (1990) Anal. Biochem. 184: 1-10.

4. Vacchiano, C.A., and Tempel, G.E. (1994) J. Appl. Physiol. 77: 2912-2917.

5. Wang, Z., Ciabattoni, G., Cre’minon, C., et al. (1995) Pharmacol. Exp. Ther. 275: 94-100.