SiaFind廣譜鍵Lectenz檢測試劑盒特異性染色方案

胰腺導管腺癌（PDAC）是一種極具侵襲性的癌癥，5年生存率僅為約11%。其預后差的主要原因是晚期診斷和有限的治療選擇。

盡管免疫檢查點阻斷（ICB）等免疫療法在多種癌癥中提高了患者生存率，但在PDAC中效果不佳，主要由于低突變負荷和多種免疫抑制機制。

CAF是PDAC腫瘤微環境（TME）中的關鍵成分，占總腫瘤質量的比例高達80%，并富含細胞外基質和特殊結締組織細胞。CAF通過分泌多種因子和細胞間相互作用，對免疫系統產生顯著影響。 唾液酸是一種糖鏈修飾，通過Siglec受體在免疫細胞上發揮免疫檢查點作用。唾液酸的過表達與多種癌癥的免疫逃避相關。

Kelly等人就CAF通過唾液酸-Siglec相互作用調節巨噬細胞分化的機制發表了在線研究《Pancreatic cancer-associated fibroblasts modulate macrophage differentiation via sialic acid-Siglec interactions》

方法

實驗材料與方法

細胞系：文章使用了多種CAF細胞系（如M1CAF、T1CAF、PS-1CAF）和腫瘤細胞系（如BxPC3、MiaPaca-2）。

免疫組織化學（IHC）：利用Lectenz品牌的唾液酸特異性探針（pan-Lectenz）對PDAC患者組織樣本進行染色，以檢測唾液酸表達。

流式細胞術：使用Lectenz探針及多種Siglec-Fc融合蛋白，分析CAF細胞系和腫瘤細胞系上唾液酸的表達及其與Siglec受體的相互作用。

共培養實驗：將CAF細胞系與單核細胞共培養，觀察單核細胞向巨噬細胞的分化情況。

基因敲除與抑制實驗：利用CRISPR-Cas9技術敲除特定基因（如CMAS、ST3GAL4、Siglec-9），或使用唾液酸轉移酶抑制劑（SI），研究唾液酸在CAF介導的免疫調節中的作用。

實驗

唾液酸在CAF中的表達與功能

組織染色：通過IHC染色發現，PDAC組織中CAF區域的唾液酸表達顯著高于腫瘤細胞區域。

轉錄組分析：利用公共數據庫和單細胞RNA測序（scRNA-Seq）數據，發現CAF高表達與唾液酸合成相關的基因，特別是ST3GAL4酶。

功能驗證：通過抑制CAF上的唾液酸合成（使用SI或CMAS敲除），發現唾液酸在CAF介導的巨噬細胞分化中起關鍵作用。

CAF與巨噬細胞的相互作用

共培養實驗：CAF細胞系與單核細胞共培養后，單核細胞顯著分化為具有免疫抑制功能的TAM樣巨噬細胞。

Siglec受體作用：發現CAF上的唾液酸作為配體，與巨噬細胞上的Siglec-7、Siglec-9、Siglec-10和Siglec-15受體相互作用，促進巨噬細胞的免疫抑制分化。

關鍵酶的作用：通過敲除CAF中的ST3GAL4酶或巨噬細胞中的Siglec-9受體，進一步驗證了唾液酸-Siglec軸在CAF介導的巨噬細胞分化中的核心作用。

在本研究中，Lectenz的SiaFind廣譜鍵Lectenz檢測試劑盒起到了關鍵性作用：

特異性染色：艾美捷SiaFind廣譜鍵Lectenz檢測試劑盒/SiaFind Pan-Specific Lectenz Kit(SK0501)被用于檢測PDAC患者組織樣本中的唾液酸表達，顯示出在CAF區域的高表達水平，這為后續實驗提供了關鍵線索。

流式細胞術分析：在流式細胞術中，Lectenz探針也被用于檢測CAF細胞系和腫瘤細胞系表面唾液酸的表達情況，以及這些細胞與Siglec受體的相互作用，為理解CAF的免疫調節機制提供了有力工具。