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AAT Bioquest--抗體與蛋白標記一站式解決方案

發布者：艾美捷科技    發布時間：2025-03-31     
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在生物科學和醫學研究領域，抗體標記已成為一項重要且常規的操作。標記物的種類繁多，從熒光染料等視覺標記到生物素等半抗原分子，可用于增強免疫復合物和蛋白-蛋白相互作用的可見性，或用于蛋白質的分離與純化。選擇哪種標記物，取決于抗體的下游應用。熒光標記主要用于細胞成像、流式細胞術、熒光印跡和免疫熒光應用；酶標記（如辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）常用于印跡、ELISA和免疫組化應用；生物素等半抗原標記則是一種更靈活的標記選項，可用于蛋白質分離、純化以及上述所有應用。

 

AAT Bioquest提供了一系列全面的抗體和蛋白標記試劑盒，這些試劑盒專為新手科學家設計，操作簡單，無需太多實踐經驗。

 

抗體標記試劑盒概覽:

 

表1. 抗體標記試劑盒對比:

項目

ReadiLink試劑盒

ReadiLink xtra試劑盒

Buccutite試劑盒

每次反應標記的抗體量

50 ug

50 ug

25 ug、50 ug或1 mg

標記化學

通過胺反應性染料靶向自由胺基

通過胺反應性染料靶向自由胺基

使用兩個專有連接子促進蛋白-蛋白偶聯

可用標記物

iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效AF染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7、生物素

iFluor染料、Alexa Fluor等效AF染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7

PE、APC、串聯染料、HRP、AP

標記物與抗體之間的鍵類型

共價鍵

共價鍵

共價鍵

是否兼容BSA或其他穩定劑

否

是

否

是否需要純化

否

否

否

偶聯所需時間

1小時

1小時

2小時

手動操作時間

約10分鐘

約10分鐘

約15分鐘

批次間差異

最小

最小

最小

應用

成像、流式細胞術、免疫熒光、WB

成像、流式細胞術、免疫熒光、WB

流式細胞術、免疫熒光、免疫組化、WB、ELISA

 

一．ReadiLink快速抗體標記試劑盒:

AAT Bioquest的ReadiLink快速抗體標記試劑盒為研究人員提供了一種快速便捷的方法，用于將微小體積的抗體與我們的優質iFluor染料、mFluor染料或其他標記物進行標記。ReadiLink試劑盒的獨特化學性質使研究人員能夠在無需純化步驟的情況下輕松標記并回收100%的抗體。由于ReadiLink偶聯物是共價標記的，因此它們適合長期儲存。它們適用于包括熒光顯微鏡、多色成像、多參數流式細胞術、原位檢測、免疫組化、熒光原位雜交、ELISA等在內的多種應用。

 

ReadiLink快速抗體標記試劑盒的關鍵特點:

1可標記單克隆抗體、多克隆抗體或其他蛋白

2快速簡便的兩步標記協議，無需化學或偶聯經驗

3適用于標記100 ?g抗體（兩次單獨的50 ?g抗體標記反應）

4100%抗體回收，**無需**對產品進行純化

5偶聯物1小時內即可使用，手動操作時間僅需約10分鐘

6可選擇iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效XFD染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7、BSA、KLH或生物素;

7避免使用任何含胺緩沖液（如Tris或甘氨酸）

8必須在標記前去除穩定蛋白（如BSA或明膠）；若需使用兼容BSA的抗體標記試劑盒，請選擇ReadiLink xtra快速抗體標記試劑盒

 

ReadiLink xtra.png

ReadiLink抗體標記工作流程

 

ReadiLink快速抗體標記試劑盒利用胺反應性標記物制備共價標記的偶聯物。這些反應性標記物選擇性地靶向并結合到抗體上的自由胺基，如賴氨酸殘基。要標記您的抗體，將抗體溶液（濃度約為1 mg/mL）與ReadiLink反應緩沖液混合，將混合物加入預配方標記物的小瓶中，并孵育30至60分鐘。最后，將TQ-Dyed猝滅緩沖液加入到您的混合物中并充分混合。這一步是關鍵，因為它消除了背景干擾以及柱純化步驟。孵育10分鐘后，您的偶聯物即可使用。

 

PBMC.png 

流式細胞術分析人PBMC細胞。使用ReadiLink快速iFluor488抗體標記試劑盒（貨號1255）或Lightning-Link快速Alexa Fluor488標記的抗人CD4抗體。使用ACEA NovoCyte流式細胞儀在FITC通道監測熒光信號。

 

標記試劑盒

CD4（SK3）-偶聯物

染色指數

ReadiLink試劑盒

CD4-iFluor488偶聯物

43

Lightning-Link試劑盒

CD4-Alexa Fluor488偶聯物

26

 

表2. ReadiLink快速抗體標記試劑盒選擇指南

熒光

等效替代

Ex/Em (nm)

成像

流式

貨號

mFluor Violet 420

Cascade Blue

398/411

 -

Yes

1105

iFluor 350

AMCA, Alexa Fluor 350

345/442

Yes

 -

1220

mFluor Violet 450

Pacific Blue

403/454

 -

Yes

1100

mFluor Violet 510

- 

414/508

 -

Yes

1110

iFluor 488

FITC, Alexa Fluor 488

491/514

Yes

Yes

1255

FITC

- 

494/520

Yes

Yes

1299

mFluor Violet 540

Pacific Orange

405/537

 -

Yes

1114

Cy3

- 

555/565

Yes

 -

1290

iFluor 555

Cy3, Alexa Fluor 555

552/567

Yes

 -

1227

mFluor Blue 570

R-PE

553/570

 -

Yes

1120

iFluor 594

Texas Red, Alexa Fluor 594

592/614

Yes

- 

1230

mFluor Green 620

 -

522/617

 -

Yes

1123

iFluor 633

Cy5, Alexa Fluor 633

638/655

Yes

Yes

1260

Cy5

 -

644/665

Yes

Yes

1292

iFluor 647

Cy5, Alexa Fluor 647

654/674

Yes

Yes

1235

mFluor Red 700

APC-Alexa Fluor 700 Tandem

657/700


Yes

1130

iFluor 680

Cy5.5, Alexa Fluor 680, IRDye 700

682/701

Yes

Yes

1240

iFluor 700

Alexa Fluor 700

693/713

Yes

Yes

1245

Cy7

 -

749/776

Yes

 -

1294

iFluor 750

Cy7, Alexa Fluor 750

753/779

Yes

 -

1250

mFluor Red 780

APC-Alexa Fluor 750 Tandem

629/780

 -

Yes

1131

iFluor 790

IRDye 800, Alexa Fluor 790

782/811

Yes

 -

1265

 

二．兼容BSA的ReadiLink xtra快速抗體標記試劑盒：

ReadiLink xtra快速抗體標記試劑盒具有BSA兼容性，將標記一抗的便利性提升到了一個新的水平。利用優化的標記協議和特別配方的標記物小瓶，ReadiLink xtra試劑盒能夠在存在常見緩沖液添加劑和穩定蛋白的情況下，快速且可重復地標記微克量的一抗。只需兩個簡單的步驟，無需柱純化，即可共價標記適用于任何基于免疫的應用的抗體。

 

ReadiLink xtra快速抗體標記試劑盒的關鍵特點:

1與BSA和其他穩定蛋白兼容

2可標記單克隆抗體、多克隆抗體或其他蛋白

3標記100 ?g抗體（兩次單獨的50 ?g抗體標記反應）

4100%抗體回收，**無需**對產品進行純化

5偶聯物1小時內即可使用，手動操作時間僅需約10分鐘

6可選擇iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效XFD染料、FITC、Cy3、Cy5或Cy7

 

表3. ReadiLink xtra Rapid 抗體標記試劑盒

產品名稱

Ex (nm)

Em (nm)

規格

貨號

ReadiLink xtra Rapid iFluor 350 Antibody Labeling Kit

344

448

2 Labelings

1950

ReadiLink xtra Rapid iFluor 488 Antibody Labeling Kit

491

516

2 Labelings

1955

ReadiLink xtra Rapid XFD488 Antibody Labeling Kit

499

520

2 Labelings

1978

ReadiLink xtra Rapid FITC Antibody Labeling Kit

491

516

2 Labelings

1970

ReadiLink xtra Rapid iFluor 555 Antibody Labeling Kit

556

569

2 Labelings

1958

ReadiLink xtra Rapid XFD555 Antibody Labeling Kit

553

568

2 Labelings

1980

ReadiLink xtra Rapid iFluor 594 Antibody Labeling Kit

587

603

2 Labelings

1960

ReadiLink xtra Rapid XFD594 Antibody Labeling Kit

590

618

2 Labelings

1982

ReadiLink xtra Rapid iFluor 647 Antibody Labeling Kit

654

669

2 Labelings

1963

ReadiLink xtra Rapid XFD647 Antibody Labeling Kit

650

671

2 Labelings

1985

ReadiLink xtra Rapid iFluor 750 Antibody Labeling Kit

759

777

2 Labelings

1965

ReadiLink xtra Rapid XFD750 Antibody Labeling Kit

752

776

2 Labelings

1988

 

三．Buccutite蛋白質到蛋白質標記試劑盒:

Buccutite交聯技術提供了一種無故障的方法，可以用辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）或藻膽蛋白共價標記蛋白質和抗體。與傳統的蛋白質-蛋白質偶聯技術（如SMCC化學標記法）相比，Buccutite偶聯明顯更穩健，要求更低。這些試劑盒允許在不到兩小時的時間內對微克量的抗體進行最佳標記（每次標記反應僅需25?g），無需純化，產率為100%。使用Buccutite標記試劑盒，常規制備共價標記的偶聯物，這些偶聯物能夠承受典型免疫測定（如ELISA、IHC和Western blot）或流式細胞術應用中通常需要的嚴格洗滌技術。

 

Buccutite快速抗體標記試劑盒的主要特點:

1標記25?g至1mg抗體;

2標簽的選擇包括HRP、AP、藻紅蛋白（PE）、別藻藍蛋白（APC）、PerCP、PE串聯染料和APC串聯染料;

3標記時間少于2小時，無需純化;

4100%抗體回收率;

Buccutite.png

人PBMC細胞的流式細胞分析：用Buccutite快速PE抗體標記試劑盒（目錄號1310）或Lightning LinkPE制備的抗人CD4抗體。使用FITC通道中的ACEA-NovoCyte流式細胞儀監測熒光信號。

 

表 4. Buccutite Rapid 抗體標記試劑盒

產品名稱

Ex (nm)

Em (nm)

規格

貨號

Buccutite Rapid Protein Crosslinking Kit *Microscale Optimized for Crosslinking 100 ug Antibody Per Reaction*

-

-

2 Labelings

1315

Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 1 mg Protein*

-

-

1 Kit

5504

Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 100 ug Protein*

-

-

1 Kit

5503

Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 25 ug Protein*

-

-

2 Labelings

5505

Buccutite Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

565

575

2 Labelings

1310

Buccutite Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

565

575

2 Labelings

1312

Buccutite Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

565

600

2 Labelings

1318

Buccutite Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

565

600

2 Labelings

1343

Buccutite Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

565

674

2 Labelings

1322

Buccutite Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

565

674

2 Labelings

1340

Buccutite Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

565

700

2 Labelings

1316

Buccutite Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

565

700

2 Labelings

1341

Buccutite Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

565

780

2 Labelings

1317

Buccutite Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

565

780

2 Labelings

1342

Buccutite Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

482

677

2 Labelings

1325

Buccutite Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

482

677

2 Labelings

1353

Buccutite Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

651

665

2 Labelings

1311

Buccutite Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

651

665

2 Labelings

1313

Buccutite Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

651

700

2 Labelings

1320

Buccutite Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

651

700

2 Labelings

1350

Buccutite Rapid APC-iFluor 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

651

713

2 Labelings

1319

Buccutite Rapid APC-iFluor 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

651

713

2 Labelings

1347

Buccutite Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction*

651

780

2 Labelings

1321

Buccutite Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*

651

780

2 Labelings

1351

 


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