PNA Bio/艾美捷自定義sgRNA/Cas9的合成服務

RNA引導的烯醇化酶（RGENs）是一種新的、可編程的基因組工程工具，適用于CRISPR/Cas系統。Cas9與兩種RNA復合時形成序列特異性內切酶，其中一種引導靶選擇（crRNA），另一種是恒定成分（tracrRNA）。

RGEN識別一個長度為23bp、以兩個鳥嘌呤（GG）結尾的靶特異性序列。這種對靶位點選擇的最低要求意味著RGEN可以被設計為切割基因組的任何區域（理論上每8bp）。

RGEN最近被證明支持人類細胞、斑馬魚和細菌的高效基因組工程。此外，RGEN的使用允許基因組工程過程的多路復用（例如，一次敲除細胞中的多個基因）。

RGEN還顯示出令人印象深刻的序列特異性活性。RGEN的活性和特異性與TALEN相當。

艾美捷PNA Bio-自定義sgRNA/Cas9：

在存在或不存在Cas9質粒的情況下，用越來越多的表達sgRNA的質粒轉染HEK293細胞。通過T7E1測定評估由CRISPR/Cas9復合物引起的In/del。

PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成服務：

1、IVT sgRNA合成服務（aRGEN）

包括設計、脫靶搜索和合成

提供50 ug sgRNA，凍干形式

注射/轉染準備就緒

瓊脂糖凝膠中確認的質量/數量

時間線：2周

2、sgRNA載體合成服務（dRGEN）

包括設計、脫靶搜索和合成

提供sgRNA和Cas9的表達質粒

時間線：2周

可在CMV或EF1a啟動子下共表達GFP/HygroR和RFP/PuroR盒的Cas9載體供選擇

3、sgRNA驗證服務

客戶提供基因名稱、物種和項目目標（KO、KI等）

包括4~8個gRNA載體的設計、脫靶搜索和合成

將CRISPR/Cas9轉染細胞并進行錯配敏感核酸酶測定以尋找最有效的核酸酶

sgRNA以表達質粒（dRGEN）或RNA形式（aRGEN）提供

還提供了用于KO篩選的PCR引物、PCR條件和錯配敏感核酸酶測定

時間線：3-6周

4、Cas9載體

CV01和CV11:Cas9（CMV或EF1a啟動子）

CV02和CV12:Cas9-HygR-GFP（CMV或EF1a啟動子）

CV03和CV13:Cas9 RFP PuroR（CMV或EF1a啟動子）

5、引導核糖核酸（gRNA）設計

一般情況下，對于1bp和2bp的錯配，找到沒有脫靶的gRNA序列，并且含有45~70%的GC。如果你不能避免偏離靶點，位于PAM附近的錯配比gRNA 5'側的錯配更可取。請注意，非規范PAM（-NAG，-NGA）也可以被切割。

我們開發了gRNA工具，可輸出脫靶序列、GC含量和其他功能。您還可以使用公開可用的工具來搜索各種選項。

6、eGFP對照sgRNA

經驗證可在體外和體內切割eGFP

注射劑，凍干粉

也可與eGFP質粒和Cas9蛋白一起作為體外切割測定的陽性對照試劑

可用尺寸：20 ug或100 ug（20 ug x 5管）

目錄編號：AR04

艾美捷科技是PNA Bio的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。