NanoTag-PentaTag對照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA實驗示例說明

一種包含FLAG、HA、MBP、Myc和ALFA標簽的對照蛋白。

五標簽對照蛋白是一種重組融合蛋白，由大腸桿菌麥芽糖結合蛋白（MBP）與四種常用的表位標簽融合而成：DYKDDDDK（FLAG）、HA、Myc和ALFA。它的分子量為47.8 kDa，可用作西方印跡、點印跡、免疫沉淀或酶聯免疫吸附試驗的陽性對照。五標簽對照蛋白的標簽順序從N端到C端依次為：FLAG、HA、MBP、Myc和ALFA。

艾美捷PentaTag對照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA：

貨號：P0102

制備于：大腸桿菌

應用：酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、免疫沉淀（IP）、西方印跡（WB）

靶點：ALFA標簽、MBP

配方：從pH 7.4的PBS中凍干，含量為100 ug。用100 uL去離子水中的50%甘油（體積比）復溶。復溶后的最終濃度為1 mg/mL。

kDa：47.8

消光系數：72310

運輸：常溫

儲存：凍干試劑可在2-8°C下保存長達12個月。復溶后，應在-20°C或更低溫度下保存。

注意事項：僅用于體外/研究目的。無毒、無危害、無傳染性。

A 五標簽對照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA（NanoTag#P0102）的示意圖。

B 每道加入2ug五標簽對照蛋白的SDS-PAGE分析。凝膠用考馬斯亮藍染色。

C 使用10或100ng重組蛋白每道的五標簽對照蛋白的西方印跡分析。印跡如下檢測：

DYKDDDDK：1.抗FLAG M2（Sigma#F1804）1:1000；2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG1 Atto643（NanoTag#N2002）1:5000；

HA：1.抗HA克隆F-7（Santa Cruz#sc-7392）1:200，2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG2a/b Atto643（NanoTag#N2702）1:5000；

MBP：1.抗MBP（Synaptic Systems#416003）1:5000，2.FluoTag-X4抗兔IgG Atto643（NanoTag#N2404）1:5000；

Myc：1.抗Myc克隆9E10（Synaptic Systems#343011）1:1000，2.FluoTag?-X2抗小鼠IgG1 Atto643（NanoTag#N2002）1:5000，

ALFA：FluoTag?-X2抗ALFA Atto643（NanoTag#N1502）1:5000。

所有印跡均使用643nm的激發波長和665nm的發射波長進行熒光檢測。

文獻參考：

G?tzke H, Kilisch M, Martínez-Carranza M, Sograte-Idrissi S, Rajavel A, Schlichthaerle T, Engels N, Jungmann R, Stenmark P, Opazo F, Frey S. The ALFA-tag is a highly versatile tool for nanobody-based bioscience applications. Nat Commun. 2019 Sep 27;10(1):4403. doi: 10.1038/s41467-019-12301-7. PMID: 31562305; PMCID: PMC6764986.