Worthington 核酸酶，S1,Nuclease測定方法

從某些神經孢子蟲和曲霉菌中分離的核酸酶S1特異性水解單鏈DNA和RNA的末端和內部磷酸二酯鍵。核酸酶S1的分子量約為34 kDa，以單體形式存在。最佳pH值范圍為4.0-4.6，由Zn2+和/或Ca2+激活。抑制劑是EDTA，檸檬酸鹽和高濃度SDS。   

作為Worthington全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Worthington主要產品核酸酶，S1,Nuclease。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。  

穩定性/存儲：為了在溶液中長期儲存長達六個月，將NUCSI稀釋至≥6000 u / ml在水中并等分冷凍。稀釋溶液可以通過添加0.1%白蛋白（Worthington代碼：BSANF）和10%甘油來穩定。   

測定方案： 

方法 

一個單位是在1?C和pH 0.033下每分鐘從熱變性DNA中釋放260μg（37.4 A6）酸溶性核苷酸的酶量 

試劑

緩沖液：0.2M 氯化鈉，0.002M 氯化鋅₂， 0.06M 通道₃COONa，pH 4.6：溶解 5.844 克氯化鈉 （MW 58.44），136 毫克氯化鋅₂（MW 136.29）和1.85ml濃冰醋酸在450ml試劑級水中。用4M NaOH將pH值調節至6.10。用試劑級水制成最終體積為500ml。 

酶稀釋劑：將40mg BSA溶解在200ml緩沖液中 

底物：切成小纖維，60mg小牛胸腺DNA，在室溫下靜置至少50小時，溶于18ml試劑級水中?？赡苄枰~外的攪拌才能達到溶解效果。將10ml DNA溶液移至10ml緩沖液中。這是天然小牛胸腺DNA溶液（底物B） 在加熱器/攪拌器上的沸水中用攪拌棒在大型 Pyrex 試管中加熱剩余的 DNA 溶液，同時攪拌 20 分鐘。立即倒入冰塊預冷凍的 1 升燒杯中?；旌系润w積的DNA溶液和冷緩沖液。這是熱變性的小牛胸腺DNA溶液（底物A）。盡快使用，防止毛坯抬高。 

15%高氯酸：將21.5ml濃高氯酸（70%）加入78.5ml去離子水中。 

程序

要清潔玻璃管（每個點兩個），添加2ml基材B進行測試。包括 2 個裝有 2ml 底物 B 的試管（用于空白）（未添加酶）和 2 個裝有 2ml 底物 A（天然 DNA 測試）的試管。 

在加入酶之前孵育 5 分鐘。 加入0.1ml酶稀釋液 在 37°C 下孵育 10 分鐘。 

加入2ml 15%高氯酸停止反應。 在冰上停留 10 分鐘。 

在臺式離心機上以 15 rpm 的速度離心 2000 分鐘。

提取3ml上清液并讀取A260。

核酸酶，S1,Nuclease相關產品：

無核酸酶白蛋白 脫氧核糖核酸酶 I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 組蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 核酸，微球菌 （NFCP） 核酸、DNA、大腸桿菌、λ/片段、RNA堿性磷酸酶 （CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC）磷酸二酯酶 I （VPH） 磷酸二酯酶 II （SPH） 蛋白酶 K （PROK/PROKS） 逆轉錄酶，重組 HIV （RTHIV）  

核酸酶，S1,Nuclease部分引用文獻：

Ando, T. 

A Nuclease Specific for Heat-Denatured DNA is Isolated from a Product of Aspergillus oryzae , Biochim Biophys Acta 114 , 158 , 1966 

Britten, R. , Graham, D. and Neufeld, B. 

, Methods in Enzymology Vol. 29 , L. Grossman and K. Moldave , Academic Press, NY , 363 , 1974 

Brookes, A. and Solomon, E. 

Evaluation of the Use of S1 Nuclease to Detect Small Length Variations in Genomic DNA , Eur J Biochem 183 , 291 , 1989  

酶是Worthington的主要產品線。從技術上講，Worthington實際上并不制造酶，而是從各種動植物組織和各種微生物來源（如細菌、真菌和霉菌）中提取酶。根據該酶在材料中的普遍性選擇特定酶的起始材料。例如，一種功能涉及使肌肉工作的酶將主要存在于肌肉組織中，因此起始材料可能是兔肌肉或豬心；參與發酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些動物組織包括牛胰腺、豬腎、牛眼、馬肝、兔肌肉、牛肝、豬心、馬血和小牛腸。各種蛋白質也從辣根、紅薯、杏仁和美洲商陸中提取。一些產品是從大腸桿菌、幾種梭狀芽胞桿菌和各種其它細菌中分離出來的。還使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和雞蛋等。   

Worthington是一家通過的ISO9001認證的家族企業。主要生產用于生物技術和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶，蛋白質，核酸和試劑盒。作為生命科學領域知名的酶類供應商，以及細胞分離酶的專家級公司，其核心酶產品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。