NanoTag-ALFA選擇器ST，保證目標蛋白的可及性，消除批次間的變化

ALFA選擇器ST（“超緊”）是一種創新的高親和力樹脂（瓊脂糖&磁性），專為高效且干凈地捕獲ALFA標簽蛋白而設計。

ALFA選擇器ST基于一種單域抗體（sdAb），這種抗體共價固定在4%交聯的瓊脂糖或瓊脂糖磁性珠子上，能夠以極高的親和力（Kd = 26 pM）結合ALFA標簽蛋白。 目標蛋白可以在酸性（例如，0.1 M 甘氨酸，pH 2.2）或變性條件下從ALFA選擇器ST中高效釋放。與ALFA標簽蛋白的極其緊密的相互作用使得使用ALFA洗脫肽的競爭性洗脫效率低下。NanoTag建議使用ALFA選擇器PE進行在生理條件和室溫下的競爭性洗脫。對于在4°C下進行高效洗脫，NanoTag建議使用ALFA選擇器CE。

ALFA選擇器ST的創新之處在于，它通過柔性連接鏈以定向和高度選擇性的方式固定活性sdAb，這不僅保證了目標蛋白的最佳可及性，同時大大消除了批次間的變化。 由于sdAb的單鏈性質及其共價連接，在使用強變性和還原條件（例如SDS樣品緩沖液）進行洗脫時，也不會觀察到IgG的輕鏈和重鏈的“泄漏”。因此，ALFA選擇器ST具有對ALFA融合蛋白的高親和力和卓越容量，同時顯示出可忽略不計的非特異性背景。

ALFA選擇器ST不僅與生理緩沖液兼容，還與高嚴格性緩沖液兼容。 因此，ALFA選擇器ST為根據實驗需求調整結合和洗滌條件提供了極大的自由度。

艾美捷ALFA選擇器ST：

貨號：N1511

克隆號： 1G5

宿主： 駱駝

生產方式： 大腸桿菌

應用： 免疫沉淀（IP）

容量： > 3 ug ALFA標簽GFP每uL裝填珠子

靶標： ALFA標簽

特異性： 識別ALFA標簽（SRLEEELRRRLTE）

配方：50%的PBS懸浮液，含有20%乙醇

運輸條件： 常溫

保存條件：在4°C下保存，最長可達12個月。不要冷凍！

注意事項： 僅限體外使用/僅用于研究。無毒、無害、無傳染性。

實驗示例：

使用ALFA選擇器ST磁性珠子進行一步親和純化的示例。

將純化的GFP-ALFA（左泳道）混入HeLa細胞裂解液（輸入）中，并與ALFA選擇器ST磁性珠子孵育。洗滌后，珠子依次與500 uM ALFA肽孵育2次，每次10分鐘（E1：肽），然后用SDS樣品緩沖液洗脫剩余蛋白（E2：SDS）。指示的各部分通過SDS-PAGE和考馬斯染色進行分析。洗脫部分對應于從1 uL樹脂洗脫的物質；B為不含底物的對照實驗。

文獻參考：

Geraud M, Cristini A, Salimbeni S, et al. TDP1 mutation causing SCAN1 neurodegenerative syndrome hampers the repair of transcriptional DNA double-strand breaks. Cell Rep. 2024;43(5):114214. doi:10.1016/j.celrep.2024.114214 (CoIP; HEK293T)

van Zwam MC, Dhar A, Bosman W, et al. IntAct: A nondisruptive internal tagging strategy to study the organization and function of actin isoforms. PLoS Biol. 2024;22(3):e3002551. Published 2024 Mar 11. doi:10.1371/journal.pbio.3002551 (CoIP; HT1080 cells)

Kohler V, Kohler A, Berglund LL, et al. Nuclear Hsp104 safeguards the dormant translation machinery during quiescence. Nat Commun. 2024;15(1):315. Published 2024 Jan 5. doi:10.1038/s41467-023-44538-8 (UV-activated site-specific crosslinking; yeast)