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特色產品DNA甲基化在基因表達調控、腫瘤發生以及其他遺傳和表觀遺傳疾病中扮演著重要角色。因此,檢測病變細胞中某些基因的甲基化情況可以為該疾病的鑒別提供非常有用的信息。近年來,已經開發了許多針對基因/序列特異性檢測DNA甲基化的方法,其中甲基化特異性PCR(MS-PCR)是最常用的方法。MS-PCR通過亞硫酸鹽轉化DNA中的胞嘧啶為尿嘧啶,能夠使用特異性的甲基化引物選擇性地擴增甲基化序列。
MS-PCR在擴增亞硫酸鹽處理后的DNA時面臨挑戰。由于原始GC豐富度造成的高目標序列冗余,會產生長鏈的胸腺嘧啶,這對于聚合酶來說通常很難讀取。此外,由于需要延長時間來擴增亞硫酸鹽處理后的DNA,以及化學轉化后引物結合的減少,使得擴增變得困難。
EpigenTek提供了Methylamp? MS-qPCR Fast試劑盒來解決這些問題。該試劑盒允許進行快速、特異性、敏感和可重復的甲基化特異性定量PCR處理。試劑盒中包含的新型熱啟動DNA聚合酶可以特別減少MS-qPCR所需的總體時間,從大約2.5小時縮短到只需70分鐘。該試劑盒還通過顯著增加引物-亞硫酸鹽DNA模板的退火,同時減少非特異性退火,從而提高MS-qPCR的靈敏度和特異性。這帶來了相當大的時間節省和更高效的MS-qPCR。
艾美捷Methylamp? MS-qPCR試劑盒具有以下特點:
極快速的程序: 可以在70分鐘內完成。
豐富的產量: 由于高擴增效率。
在MS-PCR中高度準確和特異性: 減少了假陽性結果。
便捷的主混合體系格式: 允許輕松設置反應。
簡單、可靠且一致的檢測條件。
可與任何基于模塊的實時PCR儀器一起使用。
MS-qPCR試劑盒檢測原理:
Methylamp?MS qPCR快速試劑盒提供了一種主混合格式,其中包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP、MS-PCR增強劑、優化的緩沖液和插層綠色染料。這種主混合物便于反應設置。獨特的熱啟動DNA聚合酶在環境溫度下處于非活性狀態,在95?C下孵育幾分鐘即可重新激活,可以很容易地整合到現有的熱循環步驟中。熱啟動DNA聚合酶與優化的緩沖液相結合,確保了MS qPCR的特異性和敏感性。綠色染料允許在不使用序列特異性探針的情況下進行DNA檢測和分析。

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