Cell Biolabs 2-磷酸甘油酸檢測試劑盒：基于熒光探針的2-PG高特異性檢測

2-磷酸甘油酸（2-PG）是一種甘油酸，作為糖酵解這一代謝過程中的中間產物。磷酸甘油酸變位酶將3-磷酸甘油酸轉化為2-PG，而烯醇化酶催化2-PG轉化為磷酸烯醇式丙酮酸（PEP），這是葡萄糖轉化為丙酮酸的倒數第二步。在細菌中，2-PG分子會共價結合到烯醇化酶上，導致該酶失活。磷酸甘油酸變位酶的過表達與多種人類癌癥中的腫瘤生長、存活和侵襲有關。

Cell BioLabs的2-磷酸甘油酸檢測試劑盒是一種簡單的熒光法檢測方法，可在96孔微孔板格式中測量生物樣本中的2-PG含量。每個試劑盒提供足夠的試劑進行多達100次檢測（包括空白、2-PG標準品和未知樣本）。通過與已知濃度的2-PG標準品進行比較，確定樣本中的2-PG濃度。該試劑盒的檢測靈敏度下限為3.1 ?M 2-PG。

注意：每個樣本重復需要2次檢測，一次用烯醇化酶處理（+E），一次不處理（-E）。2-PG的計算基于兩個孔的相對熒光單位（RFU）讀數差異。

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2-磷酸甘油酸檢測試劑盒檢測原理：

Cell BioLabs的2-磷酸甘油酸檢測試劑盒用于測量生物樣本中的總2-PG。2-PG在烯醇化酶的作用下被轉化為磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）。在ADP存在的情況下，PEP通過丙酮酸激酶被轉化為丙酮酸和ATP。丙酮酸在磷酸和氧氣存在的情況下，通過丙酮酸氧化酶被轉化為乙酰磷酸、二氧化碳和過氧化氫。生成的過氧化氫通過高特異性的熒光探針進行檢測。辣根過氧化物酶催化探針與過氧化氫之間的反應，二者以1:1的比例結合。樣本和標準品在96孔微孔板格式中進行比較，孵育60分鐘后，使用標準96孔熒光板讀數器讀取結果。

相關產品  

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試劑盒組成  

盒子1（藍色冰袋運輸）  

1. 2-PG標準品（部件號51671C）：1管50 ?L，濃度為20 mM的2-磷酸甘油酸。  

2. 烯醇化酶（部件號51672D）：1管50 ?L，濃度為20 U/mL。  

3. ADP（部件號51624C）：1管250 ?L，濃度為200 mM的腺苷二磷酸。  

4. 熒光探針（部件號50231C）：1管50 ?L，溶于DMSO。  

5. 辣根過氧化物酶（HRP）（部件號234402-T）：1管10 ?L，濃度為100 U/mL，溶于甘油。  

6. FAD（部件號50293C）：1管50 ?L，濃度為2 mM的黃素腺嘌呤二核苷酸。  

7. TPP（部件號50294C）：1管50 ?L，濃度為2 mM的硫胺素焦磷酸。  

8. 丙酮酸氧化酶（部件號50295C）：1管300 ?L。  

9. 丙酮酸激酶（部件號51625D）：1管200 ?L。  

盒子2（藍色冰袋運輸）  

1. 10倍檢測緩沖液（部件號51622A）：1瓶25 mL。  

2. 氯化鎂（MgCl?）（部件號51623A）：1管200 ?L，濃度為1 M。

未提供材料  

1. 10 kDa分子量截留（MWCO）離心過濾器（例如Amicon Ultra 0.5 mL）  

2. 標準96孔黑色熒光微孔板和/或黑色細胞培養微孔板

儲存條件  

收到試劑盒后，將10倍檢測緩沖液和氯化鎂在室溫下保存。將丙酮酸激酶和烯醇化酶儲存在-80℃。將其他所有組分儲存在-20℃。熒光探針對光敏感，必須妥善保存。避免多次凍融循環。

結果示例  

下圖顯示了典型的2-磷酸甘油酸檢測試劑盒結果。應該使用以下數據僅供參考。這些數據不應用于解釋或計算實際樣本結果。

文獻參考：

1. Bo?l G Pichereau V Mijakovic I Mazé A Poncet S Gillet S Giard J-C Hartke A Auffray Y and Deutscher J (2004) J. Mol. Bio. 337:485-496

2. Votyakova TV, and Reynolds IJ (2001) J. Neurochem. 79:266-277.

3. Sharif F, Rasul A, Ashraf A, Hussain G, Younis T, Sarfraz I, Chaudhry MA, Bukhari SA, Ji XY,Selamoglu Z, and Ali M (2019) Int. U. Biochem. Mol. Biol. 71:1418-1427.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的高端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。