Bioauxilium THUNDER全BTK TR-FRET細胞信號檢測試劑盒驗證數據說明

總BTK檢測試劑盒是一種均相時間分辨熒光共振能量轉移（TR-FRET）夾心免疫分析法（見圖1）。THUNDER?細胞信號分析工作流程包括3個步驟（見圖2）。細胞經過處理后，首先使用試劑盒提供的特異性裂解緩沖液對細胞進行裂解。然后，通過一對熒光標記抗體以簡單的“添加-孵育-測量”格式（單步試劑添加；無需洗滌步驟）檢測細胞裂解液中的總BTK。其中，一個抗體標記有供體熒光團（銪螯合物；Eu-Ab1），另一個標記有遠紅接受體熒光團（FR-Ab2）。兩個標記抗體與目標蛋白上不同的表位結合，使兩種染料靠近。用閃光燈（320或340納米）或激光（337納米）激發供體銪螯合物分子，會觸發從供體到接受體分子的FRET，進而發出665納米的TR-FRET信號。銪螯合物殘留的能量會在615納米處產生光。665納米處的信號與細胞裂解液中總BTK的濃度成正比。數據可以表示為665納米處的信號，或665納米/615納米的比值。

作為BioAuxilium在中國區域合作伙伴，艾美捷科技強烈推薦BioAuxilium熱銷產品THUNDER全BTK TR-FRET細胞信號檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

THUNDER全BTK TR-FRET細胞信號檢測試劑盒組分：

Eu-總BTK（5微升）

Acc-總BTK（20微升）

BTK對照裂解液（100微升）

5X裂解緩沖液2（1毫升）

10X TR-FRET檢測緩沖液（50微升）

10X磷酸酶抑制劑混合液（50微升）

驗證數據：

該分析試劑盒已通過2板分析協議驗證，可用于相對定量Raji細胞裂解液中的總BTK。

非貼壁細胞在RPMI+10%胎牛血清中培養，之后離心并用無血清RPMI重懸至所需密度。

細胞經過處理后，用5X裂解緩沖液2（最終濃度為1X）裂解細胞，并加入100X磷酸酶抑制劑混合液（稀釋至5X）。

在室溫下于軌道振蕩器（400轉/分鐘）孵育30分鐘后，將裂解液（15微升）轉移至384孔分析板中，然后加入標記抗體Eu-Ab1和FR-Ab2（5微升）以檢測總BTK。

在室溫下孵育4小時后，記錄665納米和615納米處的TR-FRET信號（EnVision?；燈激發）。

BioAuxilium成立于2013年，基于其專有的TR-FRET技術，開發出了數百個用于細胞蛋白和生物標志物定量分析的Thunder系列TR-FRET檢測試劑盒。該公司專注于設計、開發和生產高質量、經過充分驗證的TR-FRET檢測試劑盒，簡化實驗室工作流程，加速生物醫學研究。

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