酮體比色測定試劑盒的存儲說明，及樣本示例分析

β-羥丁酸（β-HB；3-羥基丁酸）是一種“酮體”?！巴w”一詞指的是三種分子：乙酰乙酸、β-HB和丙酮。β-HB和乙酰乙酸將能量從肝臟輸送到其他組織，而丙酮是由乙酰乙酸自發脫羧產生的。正常的酮癥在許多情況下很常見，如在禁食期間、長時間運動后或高脂飲食后。病理性酮癥的原因包括多器官衰竭、糖尿病、兒童低血糖、皮質類固醇或生長激素缺乏、酒精或水楊酸鹽中毒以及幾種先天性代謝錯誤。

在急性病患者中，這些酮體可以在體內積累，導致酮癥酸中毒，這可能導致潛在危及生命的情況，即代謝性酸中毒。酮癥的存在和程度可以通過測量血液中的β-HB水平來確定。通常，β-HB約占血清中酮體的75%。測量β-HB提供了酮癥水平的可靠指標，包括亞臨床酮癥的檢測。在糖尿病患者中，β-HB測量（和血糖）可用于評估糖尿病昏迷的嚴重程度，并且對于排除高滲非酮癥糖尿病昏迷至關重要。β-HB的測量也用于根據現有的高酮血癥監測胰島素需求。β-HB最近還用于評估在神經退行性疾病和抑制脂肪細胞脂解中的應用。

艾美捷Biogradetech的酮體比色測定試劑盒（BGT-KAT-200）提供了一種簡單、可重復和靈敏的工具，用于測量血漿、血清、尿液、細胞裂解物或組織勻漿中的β-HB水平。β-HB的測定方法基于3-羥基丁酸脫氫酶將D-3-羥基丁酸氧化為乙酰乙酸鹽。16伴隨著這種氧化，輔因子NAD+被還原為NADH。在黃遞酶的存在下，NADH與比色檢測器WST-1反應，產生吸收Z大值為445-455nm的甲贊染料。染料的吸光度與β-HB濃度成正比。

儲存與穩定性：如果將此試劑盒儲存在-20°C并在盒子外部標明的有效期之前使用，則試劑盒將按照規定的性能執行。

需要但不提供的物料：

1. 能夠測量445-455納米吸光度的板式閱讀器。

2. 可調節移液管和可重復使用的移液器。

3. 純凈水源；玻璃蒸餾水或HPLC級水是可以接受的。

樣本準備：

血漿和血清中的β-HB濃度可以在相當寬的范圍內變化，正常水平測量為0.02-1.5 mM，在糖尿病患者中可增加至高達3-5 mM。在糖尿病酮癥酸中毒期間，尿液中的β-HB濃度可能高達30-50 mM。

血漿：

1. 使用肝素、EDTA或檸檬酸鹽等抗凝劑采集血液。

2. 將血液在4°C下以700-1,000 x g的速度離心10分鐘。用移液管取上層黃色血漿層，不要擾動白色纖維層。將血漿存放在冰上。如果不在同一天進行檢測，則在-80°C下冷凍。血漿樣本在-80°C下儲存時可穩定一個月。

3. 在檢測前應通過10 kDa MWCO離心過濾器（遵循制造商的協議）對血漿進行過濾。

血清：

1. 無需使用抗凝劑采集血液。

2. 讓血液在25°C下凝固30分鐘。

3. 將血液在4°C下以2,000 x g的速度離心15分鐘。用移液管取上層黃色血清層，不要擾動白色纖維層。將血清存放在冰上。如果不在同一天進行檢測，則在-80°C下冷凍。血清樣本在-80°C下儲存時可穩定一個月。

4. 在檢測前應通過10 kDa MWCO離心過濾器（遵循制造商的協議）對血清進行過濾。

尿液：

尿液的收集不需要任何特殊處理。如果不在同一天進行檢測，則在-80°C下冷凍。

建議使用Cayman的肌酸酐ELISA試劑盒（貨號502330）、肌酸酐（尿液）比色法檢測試劑盒（貨號500701）或類似的檢測方法，將從尿液樣本中獲得的值標準化為肌酸酐水平。

酮體比色測定試劑盒示例矩陣屬性：

尖峰與恢復：

人血漿和尿液中添加了不同量的β-HB。血漿樣本按照樣本準備部分描述的方法進行了過濾，并在檢測中進行了驗證。尿液樣本進行了連續稀釋，并在檢測中進行了驗證。誤差條代表每個樣本多次稀釋的標準偏差。

人血漿和尿液中β-羥基丁酸的峰值和回收

酮體比色測定試劑盒部分文獻參考：

1. MacGillivray, M.H., Li, P.K., Lee, J.T., et al. J Clin Endocrinol Metab 54(3),665-668 (1982).

2. Alberti, K.G.M.M. and Hockaday, T.D.R. Br. Med. J. 2, 565-568 (1972).

3. Kashiwaya, Y., Takeshima, T., Mori, N., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(10),5440-5444 (2000)