BGT-HBsAg ELISA試劑盒檢測原理及結果分析

乙型肝炎表面抗原或HBsAg是乙型肝炎病毒包膜中Z重要的蛋白，負責急性和慢性病毒性肝炎。表面抗原包含決定因素“a”，這是所有已知病毒亞型共有的，通過兩個不同的亞組（ay和ad）在免疫學上區分。近年來，通過高靈敏度免疫分析檢測HBsAg的能力，促進了對其全球分布和流行病學的理解，并從根本上降低了輸血中感染的風險。

第四代酶免疫分析（ELISA）用于一步法測定人血漿和血清中的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。該試劑盒旨在篩查血液單位，能夠檢測HBsAg突變體，并在HBV感染患者的隨訪中得到應用。僅限于“體外”診斷使用。

艾美捷Biogradetech-HBsAg ELISA試劑盒（BGT-KET-152）檢測原理：

一種針對HBsAg的“a”、“d”和“y”決定因素的特異性小鼠單克隆抗體混合物被固定在微孔板表面。將患者血清/血漿與第二種小鼠單克隆抗體混合，這些抗體與辣根過氧化物酶（HRP）結合，并且針對“a”決定因素的不同表位和“preS”。在樣本中存在HBsAg時形成的特定免疫復合物被固相捕獲。在一步法孵育結束時，清洗微孔板以去除未結合的血清蛋白和HRP結合物。然后加入底物/色原，并且在捕獲的HBsAg免疫復合物存在的情況下，無色底物被結合的HRP結合物水解成有色最終產物。在阻斷酶反應后，通過ELISA讀數器測量其吸光度。顏色強度與樣本中存在的HBsAg量成正比。ULTRA版本特別適用于自動化篩查，并且能夠檢測“s”突變體。

所需但不提供的材料：

1. 校準的微量移液管（150微升、100微升和50微升）和一次性塑料吸頭。

2. EIA級水（雙蒸餾或去離子，經木炭處理以去除用作消毒劑的氧化性化學物質）。

3. 具有60分鐘或更長范圍的定時器。

4. 吸水紙。

5. 校準的ELISA微孔板恒溫孵育箱（干式或濕式），能夠以1300轉/分鐘 +/- 150的速度提供搖晃，設定在+37°C。

6. 校準的ELISA微孔板閱讀器，具有450納米（讀數）和620-630納米（空白）濾光片。

7. 校準的ELISA微孔板洗滌器。

8. 渦旋混合器或類似的混合工具。

樣本：準備和警告

1. 通過無菌靜脈穿刺采集血液，并使用臨床實驗室分析樣本的標準技術制備血漿或血清。使用檸檬酸鹽、EDTA和肝素制備樣本的過程中沒有觀察到影響。

2. 避免向樣本中添加任何防腐劑；特別是亞硝酸鹽，因為這種化學物質會影響結合物的酶活性，導致假陰性結果。

3. 必須用代碼或名稱清楚地標識樣本，以避免結果解釋錯誤。當試劑盒用于血液單位篩查時，強烈推薦使用條碼標簽和電子閱讀。

4. 溶血（紅色）和脂血（“乳狀”）樣本必須丟棄，因為它們可能會產生虛假結果。含有纖維蛋白殘留、大顆?；蛭⑸锝z和體的樣本也應丟棄，因為它們可能會導致假陽性結果。凝血途徑改變的樣本，在采血和制備血清/血漿后呈現顆粒，如來自血液透析患者的樣本，可能會產生假陽性結果。

5. 血清和血漿可以在+2°C至+8°C的一次性收集管中儲存，自采集后最多五天。不要冷凍一次性收集管。對于更長時間的儲存，仔細從一次性收集管中取出的血清和血漿樣本，可以在-20°C下冷凍儲存至少12個月。任何冷凍樣本不應凍融超過一次，因為這樣可能會產生影響測試結果的顆粒。

6. 如果解凍后存在一些混濁或懷疑存在微粒，應通過一次性0.2-0.8μm過濾器過濾樣本以清潔它進行測試，或者使用兩步替代方法。

結果解釋：

測試結果根據以下表格，解釋為樣本OD450nm/620-630nm（S）與截止值（Co）的比率，用數學表示為 S/Co：

陰性結果表明患者未感染乙型肝炎病毒（HBV），因此該血液單位可以進行輸血。

任何呈現不確定結果的患者應在初次樣本采集后1-2周重新采集樣本進行復測；該血液單位不應進行輸血。

陽性結果表明存在HBV感染，因此應對患者進行相應的治療或該血液單位應被廢棄。

HBsAg ELISA試劑盒文獻參考：

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