ELISpot和FluoroSpot在疫苗研究中的應用

ELISpot和FluoroSpot是評估疫苗免疫反應中最常用的免疫分析方法之一。它們以其靈敏度高、操作簡便和定量能力強而聞名，已成為疫苗研究中不可或缺的工具，從臨床前測試到臨床試驗都有廣泛應用。ELISpot和FluoroSpot分析使研究人員能夠通過檢測和計數疫苗特異性T細胞和B細胞反應來表征免疫記憶、識別潛在疫苗靶點以及測量免疫反應的持久性。

為什么在疫苗研究中使用ELISpot和FluoroSpot？

ELISpot和FluoroSpot在單細胞水平上識別抗原特異性免疫反應方面具有極高的靈敏度。這使得這兩種檢測方法對于檢測罕見免疫反應至關重要的疫苗研究非常理想。ELISpot和FluoroSpot能夠實現：

- 抗原特異性細胞的定量分析

- 多分析物檢測（FluoroSpot），用于分析多功能T細胞

- 長期免疫監測

酶聯免疫斑點（ELISpot）和熒光斑點（FluoroSpot）檢測方法用途廣泛，既可以用于檢測T細胞的細胞因子分泌，也可以用于分析疫苗接種后抗原特異性B細胞。

基礎研究：識別感興趣的表位和抗原，并研究佐劑配方。利用干擾素γ酶聯免疫斑點IFN-γ ELISpot（貨號3321-4AST-2，ELISpot Plus: Mouse IFN-γ (ALP)）可以輕松篩選大量的T細胞表位以及測試佐劑的有效性。熒光斑點FluoroSpot（貨號FSP-314245-2，FluoroSpot Plus: Mouse IFN-γ/IL-2/TNF-α）可以進一步揭示疫苗是驅動Th1還是Th2反應，以及由此產生的體液反應。B細胞酶聯免疫斑點ELISpot（貨號3825-2A，ELISpot Flex: Mouse IgG (ALP)）和免疫球蛋白酶聯免疫吸附試驗ELISA（貨號3825-1AD-6，ELISA Flex: Mouse IgG (ALP)）可用于識別抗原特異性B細胞和體液反應。

臨床前研究：在動物模型（小鼠、大鼠、非人靈長類動物等）中評估疫苗效力，以測試效力、耐受性、優化劑量、毒性以及期望或不期望的免疫原性。利用熒光斑點FluoroSpot可以從樣本中獲取更多數據，通過評估反應T細胞分泌的多種細胞因子以及評估早期急性B細胞反應或類別轉換以及隨后類別轉換的IgG+記憶B細胞的發育。

臨床試驗：監測人類受試群體的免疫反應，以評估期望的免疫原性和效力。同樣，為什么不使用FluoroSpot通過評估輔助T細胞極化和高親和力記憶B細胞的產生來從樣本中獲得更多的數據？通常會進行縱向采樣，以評估免疫反應的發展和持久性。

上市后監測：持續進行免疫監測，以評估持久的免疫反應、是否需要加強針以及T細胞和B細胞的免疫記憶，可采用酶聯免疫斑點ELISpot或熒光斑點FluoroSpot。

監測疫苗特異性T細胞

在疫苗研究中，細胞免疫以及高親和力、中和性抗體的生成通常是評估的主要結果。T細胞酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot檢測方法可以檢測到由疫苗衍生肽刺激產生的細胞因子，如干擾素γ（IFN-γ）、白細胞介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子α（TNF-α），從而提供有關T細胞反應的強度及其功能的見解。使用熒光斑點（FluoroSpot）來表征多功能T細胞，可以進一步深入了解疫苗反應以及哪些T細胞表型被激活。Mabtech甚至設計了一種非常適合評估疫苗誘導的T細胞反應的熒光斑點試劑盒：熒光斑點Path：人免疫監測（3色）,貨號FSP-010209-TD-2。

示例：COVID-19疫苗研究

在COVID-19大流行期間，酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot被廣泛用于評估對SARS-CoV-2的T細胞反應。有研究人員使用了熒光斑點Flex：人干擾素γ/腫瘤壞死因子α/白細胞介素2/顆粒酶B檢測試劑盒，分析了對SARS-CoV-2變異株的反應，發現三劑mRNA疫苗提供了增強的T細胞反應性，即使是對奧密克戎等變異株也是如此。

熒光斑點Path：SARS-CoV-2（S1scan+SNMO）人干擾素γ/白細胞介素2，貨號FSP-0102-P1-1，已在多篇文獻中被用于計算疫苗接種或感染后針對SARS-CoV-2特異性的T細胞。該試劑盒不僅包含所有所需的熒光斑點試劑，還包括經過驗證的、特別設計的肽段池，這些肽段池已在真實的疫苗接種和感染患者樣本上進行了驗證。

監測疫苗特異性B細胞

通過酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot分析B細胞反應，可以檢測和計數針對疫苗抗原的抗體分泌細胞。這對于病毒疫苗尤為重要，因為體液免疫在其中發揮著關鍵作用。這些檢測方法可以定量檢測記憶B細胞和漿母細胞，從而全面了解早期和后期的體液免疫反應。

示例：流感疫苗和COVID-19疫苗

流感疫苗的研究表明，酶聯免疫斑點ELISpot是檢測長期存活的記憶B細胞反應的敏感方法，可能比單獨檢測抗體滴度更為可靠。同樣，在COVID-19疫苗的研究中，酶聯免疫斑點（ELISpot）檢測方法被用于分析長期記憶B細胞反應，這對于理解防止再次感染的免疫反應至關重要。

疫苗研究領域：

流感疫苗：流感疫苗對于控制季節性流感爆發以及預防易感人群的嚴重疾病至關重要。酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot檢測方法經常被用于流感疫苗的開發，以評估T細胞和B細胞的反應。通過檢測干擾素γ（IFN-γ）和白細胞介素2（IL-2）等細胞因子，酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot能夠提供有關疫苗接種或感染后T細胞激活的詳細信息。熒光斑點FluoroSpot可以同時評估多種細胞因子反應，捕捉到T細胞對流感抗原（如血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA））反應的全部功能范圍。2014年的一項研究甚至表明，與流式細胞術方法相比，熒光斑點FluoroSpot在評估流感特異性反應方面具有更高的靈敏度。對于B細胞反應，熒光斑點FluoroSpot可以檢測流感特異性的抗體分泌細胞（ASCs），從而深入了解體液免疫以及保護性抗體的生成。這些工具在研究季節性疫苗與實驗性通用流感疫苗的免疫反應方面特別有用，通用流感疫苗旨在誘導更廣泛和更持久的免疫反應。這些檢測方法幫助研究人員優化疫苗配方和佐劑，跟蹤免疫反應隨時間的變化，并識別保護相關的因素，從而支持更有效流感疫苗的開發。

瘧疾疫苗：瘧疾疫苗的開發一直充滿挑戰，尤其是在瘧疾發病率較低的地區，自然獲得的免疫力非常有限。酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot檢測方法已成為評估瘧疾特異性T細胞和B細胞反應的必要工具。這些檢測方法被用于檢測對關鍵瘧疾抗原的反應，例如環子孢子蛋白（CSP）和瘧原蟲表面蛋白1（MSP1），這些抗原通常用于包含輻照子孢子或重組蛋白的實驗性疫苗中。酶聯免疫斑點ELISpot的高靈敏度使其能夠檢測到頻率較低的抗原特異性反應，這使其成為評估臨床試驗中疫苗效力以及在瘧疾自然暴露率較低的人群中評估疫苗效力的寶貴工具。

SARS-CoV-2 疫苗：正如以上提到的，在 COVID-19 大流行期間，酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot在快速開發針對 SARS-CoV-2 的疫苗中發揮了關鍵作用。即使在今天，這些檢測方法仍在用于評估這些疫苗誘導的免疫記憶的持久性以及它們對新出現的變體的有效性。

結核病疫苗：結核病仍然是一個重大的全球健康挑戰，需要一種能夠產生持久免疫力的有效疫苗。酶聯免疫斑點ELISpot和熒光斑點FluoroSpot檢測方法在結核病疫苗研究中發揮了關鍵作用，為T細胞反應提供了詳細的見解。特別是熒光斑點FluoroSpot檢測方法可以同時檢測多種細胞因子，如干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細胞介素2（IL-2），這些細胞因子與對抗結核分枝桿菌的保護性免疫有關。通過分析多功能T細胞反應，研究人員可以更好地了解與病原體負荷減少相關的免疫機制，最終有助于開發更有效的結核病疫苗，這些疫苗能夠激發強大且持久的免疫反應。