RNA甲基化研究的完整解決方案 | EpigenTek

我們提供最全面的RNA甲基化研究產品，涵蓋實驗流程的每一步，從上游到下游。借助EpigenTek的RNA甲基化產品系列，拓展您對RNA的理解 

什么是RNA甲基化？

RNA甲基化是一種RNA的轉錄后修飾，它通過改變基因調控而不改變結構基因序列來發揮作用。這種修飾在包括病毒在內的眾多生物物種中都有發現，并與重要的生物學過程密切相關。與DNA甲基化類似，RNA甲基化是可逆的，在生命中廣泛存在，主要涉及甲基基團的添加。然而，RNA甲基化在不同類型的RNA中的分布并不均勻。RNA甲基化發生在tRNA、rRNA、mRNA、tmRNA、snRNA、snoRNA、miRNA和病毒RNA中。mRNA上較為熟悉的兩種修飾包括N6-甲基腺苷（m6A）和5-甲基胞嘧啶（5mC）。 

在所有化學上不同的RNA修飾中，N6-甲基腺苷（m6A）是最常見的。它涉及腺苷堿基在氮-6位的甲基化。通常被稱為“第五RNA堿基”，m6A占真核生物中所有RNA甲基化的80%以上。特別是，這種RNA修飾被認為對mRNA調控很重要，因為m6A在3'非翻譯區（3'UTR）富集。此外，它還與多種癌癥相關，包括白血病、乳腺癌和前列腺癌。  

另一種在各種RNA分子中發現的豐富的表觀遺傳標記是5-甲基胞嘧啶（5mC），它涉及在5-碳環上添加甲基基團。據報道，5mC存在于多種不同的RNA類型中，包括rRNA、tRNA、eRNA以及mRNA和各種非編碼RNA。檢測RNA中5mC修飾的最理想方法是通過亞硫酸氫鹽轉化后進行高通量測序。  

哪種RNA甲基化工具適合您的實驗？

RNA修飾，尤其是RNA甲基化的重要性是顯而易見的。然而，RNA甲基化研究領域仍處于起步階段。許多已建立的檢測方法嚴重依賴于抗體依賴的轉錄組范圍技術，其中大多數集中在RNA中m6A的發生上，因為其生物學作用已被廣泛研究。5mC RNA檢測技術，包括亞硫酸氫鹽測序，也引起了關注，因為5mC RNA與多種細胞過程和腫瘤發生有關。新的生化方法與高通量測序相結合，使得研究整個轉錄組以及繪制單個修飾成為可能，揭示RNA修飾酶或蛋白質結合因子的真正功能。 

在開始您的RNA甲基化研究項目之前，我們建議回顧與您計劃實驗相關的任何可用文獻。如果其他研究人員進行了類似的工作，您應該利用他們的信息，并將其作為您研究的基礎，仔細審查以避免潛在的障礙。 

如果您希望分析RNA中m6A或5mC修飾的全局水平，我們建議從對樣本中甲基化狀態的簡單預篩查開始。這些方法可通過我們的熱門產品——m6A RNA甲基化定量試劑盒和5-mC RNA甲基化ELISA試劑盒實現。對于直接靶向m6A或5mC，我們建議使用我們的m6A富集試劑盒或亞硫酸氫鹽轉化試劑盒。 

訪問我們的RNA甲基化資源中心，獲取更多關于RNA甲基化的有用信息。為了方便您了解我們的產品，我們還詳細介紹了RNA甲基化產品的優勢。對于涉及病毒和宿主RNA修飾的研究，請訪問我們的表觀遺傳病毒RNA修飾工作流程頁面。  

RNA甲基化研究步驟詳細信息

1. RNA分離提取

RNA分離是任何RNA甲基化研究的關鍵第一步。我們的RNA制備試劑盒能夠在短時間內高效分離來自組織、培養細胞和無細胞液體樣本（特別是唾液和鼻咽拭子）的總RNA。純化的RNA可用于多種常規應用，如RT-PCR、cDNA合成、Northern blot、差異顯示、引物延伸和mRNA選擇。

查看更多提取試劑盒：點擊鏈接 

2. 整體m6A和5mC RNA定量

EpigenTek的m6A和5mC RNA甲基化試劑盒使研究人員能夠輕松確定RNA甲基化如何影響他們的研究項目。我們的試劑盒可以直接定量N6-甲基腺苷（m6A）或測量任何物種（包括哺乳動物、植物、真菌、細菌和病毒）分離的總RNA中的5-mC。

3. RNA亞硫酸氫鹽轉化和cDNA合成

亞硫酸氫鹽處理技術，也稱為亞硫酸氫鹽轉化，是準備RNA進行特異性甲基化分析的理想方法。該過程將胞嘧啶轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，可通過高通量測序輕松區分。亞硫酸氫鹽轉化后的RNA還可用于生成cDNA，用于分析甲基化狀態的各種下游應用。

4. NGS文庫準備

文庫準備是下一代測序（NGS）的關鍵步驟。我們為NGS提供了許多經濟實惠的解決方案，包括方便地從難以處理的樣本中構建高質量的RNA/DNA文庫，可用于各種基于Illumina的平臺。

5. MeRIP和m6A-Seq分析

使用我們的CUT&RUN RNA m6A富集試劑盒獲得m6A RNA的高分辨率圖譜。憑借獨特的核酸酶混合物，這些試劑盒僅分離抗體結合位置的RNA片段，并同時切割/去除目標區域下方的RNA序列片段。我們的試劑盒可以從低輸入量的RNA中富集含有m6A修飾的RNA片段，非特異性背景水平極低。CUT&RUN RNA m6A-Seq試劑盒還包括文庫準備步驟，作為額外優勢。

6. 研究RNA甲基化的抗體

N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物中RNA分子中最常見和最豐富的修飾之一。m6A的化學性質使其難以區分，因此分析這種修飾的方法高度依賴于抗m6A抗體的質量。我們的多克隆和單克隆m6A抗體可用于特異性檢測RNA中的m6A。它們經過嚴格測試，保證在各自的應用中有效。

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