BioAssay Systems EnzyFluo 法尼基轉移酶抑制劑篩選試劑盒，安全：非放射性檢測

法尼基轉移酶（FTase，EC2.5.1.58）催化法尼基焦磷酸（FPP）上的法尼基基團轉移到靶蛋白C末端的半胱氨酸殘基上。如果未得到適當調控，法尼基化蛋白（包括Ras超家族的小GTP酶）可能導致發育障礙和癌癥。簡單、直接且高通量的抑制劑篩選檢測方法在腫瘤學研究中具有廣泛的應用。BioAssaySystems的EIFT-400檢測試劑盒提供了一種便捷的熒光法，用于篩選潛在的FTase抑制劑。在此檢測中，FTase與法尼基焦磷酸和丹磺酰肽底物發生反應，可在λem/ex=340/550nm處測量熒光。通過熒光的減少來確定抑制作用。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品EnzyFluo 法尼基轉移酶抑制劑篩選試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

安全：非放射性檢測。

均質且便捷：“混合-孵育-測量”型檢測，無需洗滌和試劑轉移步驟。

高通量：在384孔板格式中，通常觀察到的Z’因子為0.8及以上。可自動化操作，每天可檢測數千個樣本。

應用

-用于FTase抑制劑的高通量篩選和藥物調節劑的評估。

操作步驟

檢測原理：本檢測基于酶促動力學反應。為確保孵育時間一致，加入工作試劑時應迅速，混合應簡短但充分。建議使用多通道移液器。注意：試劑盒中不包含FTase酶。

試劑準備：使用黑色、平底384孔板。在檢測前，將所有組分平衡至室溫，并在打開前短暫離心試管。每次檢測運行應新鮮配制工作試劑（WR）。

酶準備：酶應在緩沖液中配制并新鮮使用。以下協議針對重組大鼠FTase酶（JenaBioscience，產品編號PR-102）進行了優化。如果使用不同的酶，建議您實驗確定每孔使用的最佳酶量。

測試化合物準備：將測試化合物溶解在合適的溶劑中，例如DMSO。建議首先測試酶對所選溶劑的耐受性。在下面的例子中，大鼠FTase（JenaBioscience，產品編號PR-102）被發現可耐受高達2%（體積比）的DMSO。試劑盒中包含洛納法尼布作為IC50對照。

1.酶和對照：將37.2?g/mL的FTase（最終濃度為7.4?g/mL）分別轉移5?L到黑色384孔板的不同孔中。至少保留一個孔作為無抑制劑（對照）孔和一個無酶（空白）孔。分別向對照孔和空白孔中加入5?L的37.2?g/mLFTase和5?L的檢測緩沖液。建議至少進行雙份反應。

2.加入測試化合物：向酶孔中加入5?L測試化合物。向對照孔和空白孔中加入測試化合物溶解的溶劑。例如，如果測試化合物溶解在1%DMSO中，則向這些孔中加入5?L的1%DMSO。立即混合，并在室溫下孵育10分鐘，使測試化合物與FTase相互作用。

3.工作試劑準備：通過混合以下成分，為所有孔準備足夠量的工作試劑（WR）：每孔0.5?L底物、20?L檢測緩沖液和1?LTCEP。將15?LWR轉移到所有孔中。立即輕拍平板以混合，并在室溫下孵育。

4.讀取熒光強度：在60分鐘時，在λex/em=340/550nm處讀取熒光強度。

實驗示例

-重組大鼠FTase與不同濃度的洛納法尼布共同孵育。每種抑制劑濃度中均含有1%（體積比）的DMSO。在7.4?g/mL的FTase酶存在下，洛納法尼布的IC50值被確定為25.6nM。

文獻參考：

[1]. Appels, Natalie et al (2005). Development of farnesyl transferase inhibitors: a review. Oncologist: vol. 10(8) 565-78.

[2]. Long, Stephen et al (2001). The crystal structure of human protein farnesyltransferase reveals the basis for inhibition by CaaX tetrapeptides and their mimetics: PNAS: vol. 98(23) 12948-12953.

[3]. Wang, Jingyuan et al (2017). New tricks for human farnesyltransferase inhibitor: cancer and beyond. MedChemComm: vol.

8(5) 841-854.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。