BioAssay Systems【干冰】EnzyChrom 乙酰膽堿檢測試劑盒樣本處理&檢測步驟

乙酰膽堿是一種在膽堿能神經元中產生的神經遞質。 它在骨骼肌運動、平滑肌和心肌的調節以及學習、記憶和情緒中發揮重要作用。BioAssay Systems的方法提供了一種簡單、直接且高通量的檢測方法，用于測量生物樣本中的乙酰膽堿。在該檢測中，乙酰膽堿被乙酰膽堿酯酶水解為膽堿，膽堿隨后被膽堿氧化酶氧化為甜菜堿和H?O?。生成的H?O?與特定染料反應，形成粉紅色產物。在570 nm處的吸光度或在530/585 nm處的熒光強度與樣本中的乙酰膽堿濃度成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品【干冰】EnzyChrom 乙酰膽堿檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

使用20 uL樣本。線性檢測范圍：比色法檢測為10到200 uM，熒光法檢測為0.4到10 uM乙酰膽堿。

應用：

檢測：血清、血漿、尿液、唾液、乳汁、組織和細胞培養等生物樣本中的乙酰膽堿。

藥物發現/藥理學：評估藥物對乙酰膽堿代謝的影響。

試劑盒組成：

檢測緩沖液：10 mL

乙酰膽堿酯酶：120 uL

酶混合液：干燥

染料試劑：120 uL

標準品：400 uL（2 mM乙酰膽堿）

儲存條件：試劑盒在冰上運輸。將所有組分儲存于-20°C。保質期：收貨后6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

樣本處理：

液體樣本（如血清和血漿）可以直接檢測。組織和細胞裂解液可以通過在冰冷的1×PBS中勻漿并離心（14,000 rpm，5分鐘）來制備。使用清亮的上清液進行檢測。乳汁樣本需要通過將600 uL乳汁與100 uL 6 N HCl混合來澄清。以14,000 rpm離心5分鐘。將300 uL上清液轉移到干凈的試管中，并用50 uL 6 N NaOH中和。中和后的上清液可用于檢測（稀釋因子n = 1.36）。

注意：(1) 含有巰基（-SH）的試劑（如β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇，>5 uM）會干擾此檢測，應在樣本準備中避免使用。  

  (2) 該檢測基于酶催化的動力學反應。加入工作試劑應迅速，混合應簡短但要充分。

檢測步驟：

1. 平衡試劑。將所有組分恢復至室溫。打開前短暫離心試管。檢測過程中將解凍的試管置于冰上。用120 uL檢測緩沖液復溶酶混合液。復溶后的酶混合液在-20°C儲存時穩定1個月。注意：復溶后的酶混合液解凍后可能會出現黃色沉淀。如果出現沉淀，通過以14,000 rpm離心2分鐘將其沉淀，并使用清亮的上清液。

2. 標準品制備。將24 uL 2 mM標準品與216 uL去離子水混合（最終濃度為200 uM）。

將20 uL稀釋后的標準品分別加入透明平底96孔板的各個孔中。

樣本：將每個樣本的20 uL分別加入孔中。注意：如果已知樣本中含有膽堿，需額外準備一個樣本空白孔，加入20 uL樣本。

3. 顯色反應。按每孔混合85 uL檢測緩沖液、1 uL乙酰膽堿酯酶、1 uL酶混合液和1 uL染料試劑來準備足夠量的工作試劑。向每個孔中加入80 uL工作試劑。注意：對于含有膽堿的樣本，準備不含乙酰膽堿酯酶的空白對照試劑（即85 uL檢測緩沖液、1 uL酶混合液和1 uL染料試劑）。向每個樣本空白孔中加入80 uL對照試劑。

立即輕拍平板以混合。在室溫下孵育30分鐘。

4. 讀取吸光度。在570 nm（550-585 nm）處讀取吸光度。

文獻參考：

1. He C, et al (2012). Embryonic exposure to benzo(a)pyrene influences neural development and function in rockfish (Sebastiscus marmoratus). Neurotoxicology 33(4):758-62.

2. Chen L et al (2012). Acute exposure to DE-71: Effects on locomotor behavior and developmental neurotoxicity in zebrafish larvae.Environ Toxicol Chem. 31(10):2338-44.

3. Baitharu, I., et al (2013). Withania somnifera root extract ameliorates hypobaric hypoxia induced memory impairment in rats. Journal of ethnopharmacology 145(2): 431-441.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。