BioAssay Systems【干冰】EnzyChrom NADP+/NADPH檢測試劑盒，高通量，每天可處理數千個樣本

吡啶核苷酸在代謝中發揮重要作用，因此，監測其濃度水平一直備受關注。 NADP?/NADPH的定量測定在涉及細胞或組織能量轉換和氧化還原狀態的研究中具有應用價值。簡單、直接且適合自動化的NADP?/NADPH濃度測量程序非常受歡迎。BioAssay Systems的EnzyChrom? NADP?/NADPH檢測試劑盒基于葡萄糖脫氫酶循環反應，其中生成的NADPH還原甲臜（MTT）試劑。在565 nm處測量的還原產物顏色強度與樣本中的NADP?/NADPH濃度成正比。該檢測對NADP?/NADPH具有高度特異性，且不受NAD?/NADH的干擾。我們的檢測方法是一種方便測量NADP、NADPH及其比例的方法。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品【干冰】EnzyChrom NADP+/NADPH檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應用：

直接檢測：細胞或組織提取物中的NADP?/NADPH濃度及其比例。

主要特點：

靈敏且準確。96孔板檢測的檢測限為0.1 uM，線性范圍可達10 uM NADP+/NADPH。

方便。操作步驟簡單，只需加入一種工作試劑，并在室溫下分別于0時刻和30分鐘時讀取吸光度。無需37°C加熱器。

高通量?？勺鳛楦咄?6孔板檢測方法，每天可處理數千個樣本。

試劑盒組成（96孔板進行100次檢測）：

檢測緩沖液：10 mL

酶A：120 uL

MTT溶液：1.5 mL

酶B：120 uL

G6P：120 uL

NADP標準品：0.5 mL（1 mM）

NAD(P)/NAD(P)H提取緩沖液：各12 mL

儲存條件：試劑盒在冰上運輸。將所有試劑儲存于-20°C。保質期：收貨后6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

檢測步驟：

1. 樣本準備。對于組織樣本，每份稱取約20 mg組織，用冰冷的PBS洗滌。對于細胞樣本，用冰冷的PBS洗滌細胞，并每份收集約10?個細胞。將樣本（組織或細胞）在1.5 mL離心管中用100 uL NADP提取緩沖液（用于NADP測定）或100 uL NADPH提取緩沖液（用于NADPH測定）進行勻漿。將提取物在60°C加熱5分鐘，然后加入20 uL檢測緩沖液和100 uL另一種提取緩沖液以中和提取物。短暫渦旋振蕩后，以14,000 rpm離心5分鐘。使用上清液進行NADP/NADPH檢測。測定NADP和NADPH濃度需要分別從兩個獨立樣本中提取。

2. 標準曲線制備。將5 uL 1 mM標準品與495 uL蒸餾水混合，制備500 uL 10 uM NADP預混合液。將40 uL標準品分別加入透明底96孔板的各個孔中。

樣本：每孔加入40 uL樣本，分別置于不同的孔中。

3. 試劑準備。為獲得最佳結果，建議在制備工作試劑前將酶恢復至室溫（15-30分鐘）。對于每個反應孔，通過混合80 uL檢測緩沖液、1 uL酶A、1 uL酶B、1 uL G6P和14 uL MTT來制備工作試劑。建議現配現用。

4. 反應。每孔快速加入80 uL工作試劑。輕拍平板以短暫但充分混合。

5. 讀取吸光度。在565 nm（520-600 nm）處讀取0時刻的吸光度（OD?）和室溫孵育30分鐘后的吸光度（OD??）。

6. 計算。從標準品和樣本孔的OD30中減去OD0。使用ΔOD值從標準曲線上確定樣本的NADP/NADPH濃度。

注意：如果樣本的ΔOD值高于10 uM標準品的ΔOD值，則用蒸餾水稀釋樣本并重復檢測。將結果乘以稀釋因子。

一般注意事項：

1. 在這些濃度下，NADP和NADPH的標準曲線是相同的。由于溶液中的NADPH不穩定，我們僅提供NADP作為標準品。

2. 該檢測基于酶催化的動力學反應。加入工作試劑應迅速，混合應簡短但要充分。推薦使用多通道移液器。

3. 以下物質會干擾檢測，應在樣本準備中避免使用：EDTA（>0.5 mM）、抗壞血酸、SDS（>0.2%）、NaN3、NP-40（>1%）和Tween-20（>1%）。

文獻參考：

1. Kwak, S., et al. (2020). Redirection of the glycolytic flux enhances isoprenoid production in Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology Journal 15(2): e1900173.

2. Zhang, Y., et al. (2021). Hepatic stellate cells specific liposomes with the Toll-like receptor 4 shRNA attenuates liver fibrosis. Journal of Cellular and Molecular Medicine 25(2): 1299-1313.

3. Hu, Li, et al (2019). Melatonin decreases M1 polarization via attenuating mitochondrial oxidative damage depending on UCP2 pathway in prorenin-treated microglia. PloS one 14.2: e0212138. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。