DNA甲基化整體水平定量檢測大變革：ELISA如何顛覆傳統方法？

DNA甲基化，特別是胞嘧啶殘基在C-5位的甲基化（5-甲基胞嘧啶，或5-mC），在基因表達調控和各種細胞過程的調節中起著關鍵作用。表觀遺傳異常與人類疾?。òò┌Y）有關。因此，定量分析DNA甲基化整體水平對于理解與生理和病理條件相關的表觀遺傳變化至關重要。目前，幾種方法已在研究實驗室中被廣泛用于定量分析全球DNA甲基化，每種方法都有其獨特的原理、優點和缺點。

高效液相色譜/質譜（HPLC/MS）

高效液相色譜結合質譜（HPLC/MS）被認為是定量分析修飾核苷酸堿基的“金標準”，因其高準確性、精確性和靈敏度，已被常規應用于DNA甲基化的定量分析。典型的HPLC/MS流程首先涉及核酸酶P1和堿性磷酸酶對分離DNA的消化。在消化后的DNA純化后，脫氧核糖核苷通過C18柱的反相HPLC分離。隨后，通過串聯質譜獲取脫氧核糖核苷的質量色譜圖，并基于純修飾脫氧核糖核苷標準品的標準曲線對目標修飾進行定量。盡管HPLC/MS具有高度定量和可重復性，但它需要昂貴的儀器設備、耗時的長流程、專業的技術專長和經過培訓的人員。

亞硫酸氫鹽轉化

化學處理DNA是一種流行的選項，它能夠特異性地針對甲基化和未甲基化的胞嘧啶殘基，并且可以與下游的測序相結合，用于全基因組DNA甲基化的單堿基分辨率分析（全基因組亞硫酸氫鹽測序）。對DNA進行亞硫酸氫鹽處理，然后進行PCR擴增、克隆和測序，可以可靠地獲取DNA胞嘧啶甲基化狀態的信息。亞硫酸氫鹽轉化是一種化學反應，其中未甲基化的胞嘧啶被脫氨基為尿嘧啶，而5-mC保持不變。因此，甲基化和未甲基化的DNA胞嘧啶殘基得以區分。然而，傳統的轉化方法需要較長的流程時間，這會導致嚴重的DNA降解、不適當的5-mC脫氨基以及低胞嘧啶轉化率。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）

DNA甲基化酶聯免疫吸附測定（ELISA）提供了一種簡單、便捷且經濟實惠的方法，用于快速評估特定甲基化DNA目標的全球水平，然后再考慮采用上述更深入且成本更高的方法。此類基于ELISA的方法使用抗體檢測和定量DNA樣本中的特定DNA甲基化修飾。這些測定通常涉及將DNA固定在固體表面（如微孔板）上，然后應用抗體進行檢測。與傳統ELISA在測定流程方面類似（例如，樣本結合到測定孔、目標物被一抗捕獲、通過酶偶聯二抗進行信號檢測），與傳統ELISA相比，DNA甲基化ELISA極為靈敏，檢測限更低，能夠評估更廣泛的樣本類型。

無論是5-mC還是5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC），DNA甲基化ELISA都是一種高通量、成本效益高的方法，用于分析各種修飾DNA形式。作為表觀遺傳學研究工具研發的先鋒，EpigenTek利用其專有技術開發了快速、準確且被廣泛引用的全球DNA甲基化定量免疫測定。全局DNA甲基化（5-mC）ELISA試劑盒（貨號#P-1030）和全局DNA羥甲基化（5-hmC）ELISA試劑盒（貨號#P-1032）專門設計為使用完整的輸入DNA作為起始材料，消除了類似測定所需的額外樣本處理（例如，變性、片段化）的需要。這些試劑盒結合了ELISA的便捷性和速度，以及高靈敏度、特異性、通用性、準確性和靈活性，使其成為研究全球DNA甲基化的研究人員的寶貴工具。