BioAssay Systems 異檸檬酸脫氫酶測定試劑盒操作程序&樣本準備方案

異檸檬酸脫氫酶（IDH）是一種催化異檸檬酸和α-酮戊二酸相互轉化的酶。IDH存在三種亞型：IDH3使用輔酶NAD?，并催化三羧酸循環（TCA循環）的第三步；而IDH1和IDH2使用輔酶NADP?，并在TCA循環之外催化相同的反應。本試劑盒用于檢測使用NADP?的IDH亞型的活性。IDH1和IDH2的突變與多種腦腫瘤和急性髓系白血病有關。BioAssay Systems的非放射性、比色法IDH檢測試劑盒基于NADPH偶聯的酶促反應，將四氮雜唑鹽MTT還原為其還原形式，該還原形式在565納米處具有最大吸收峰。在565納米處的吸光度增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品異檸檬酸脫氫酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點：

- 快速且靈敏。線性檢測范圍（20微升樣本）：30分鐘反應時，0.1 - 100 U/L。

- 方便且高通量。均相“混合-孵育-測量”型檢測?？奢p松在高通量篩選（HTS）液體處理系統上自動化運行，每天可處理數千個樣本。

應用領域：

- 生物樣本（如血漿、血清、組織和培養基）中IDH活性的測定。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）：

- 檢測緩沖液：10毫升

- 二氫硫色素：120微升

- NADP/MTT溶液：1毫升

- 校準液：1.5毫升

- 底物：1毫升

儲存條件：

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。保質期：收貨后6個月。

注意事項：

試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規注意事項。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作程序：

本檢測基于動力學反應。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑的速度應快，混合應簡短但充分。建議使用多通道移液器。為了獲得最佳的IDH活性，檢測應在37°C下進行。檢測也可以在室溫下進行，但IDH的活性會顯著降低，可能需要>1小時的反應時間才能獲得足夠的靈敏度。

樣本準備：

- 血清和血漿：可以直接用于檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50毫克）在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中均質化。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取出上清液用于檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當體積內均質化或超聲處理細胞。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取出上清液用于檢測。

- 樣本保存：所有樣本可以在-20°C至-80°C下保存至少一個月。

- 試劑準備：將解凍后的二氫硫色素置于冰上，將其他所有試劑平衡至37°C。使用前短暫離心試管。

- 工作試劑（WR）的配制：通過混合以下成分制備足夠所有檢測孔的工作試劑：對于每個孔，9微升底物、9微升NADP/MTT溶液、1微升二氫硫色素和70微升檢測緩沖液。建議新鮮配制工作試劑。

反應準備：

1. 將100微升水（ODH?O）和100微升校準液（ODCAL）溶液分別加入透明平底96孔板的孔中。

2. 將每個樣本的20微升分別加入不同的孔中。向每個樣本孔中加入80微升工作試劑。輕拍孔板以混合。

3. 在37°C下孵育。使用孔板讀取器在10分鐘（OD??）和30分鐘（OD??）時分別讀取565納米處的吸光度。

示例：

96孔平板測定中印度洋地黃含量的線性

文獻：

1. Zhao, X et. al. (2013) Enzymatic Characterization of a Type II Isocitrate Dehydrogenase from Pathogenic Leptospira interrogans serovar Lai Strain 56601. Appl Biochem Biotechnol. Epub ahead of print.

2. Chen, C et. al. (2013) Cancer-associated IDH2 mutants drive an acute myeloid leukemia that is susceptible to Brd4 inhibition. Genes Dev.27(18):1974-85.

3. Chaumeil, MM et. al. (2013) Non-invasive in vivo assessment of IDH1 mutational status in glioma. Nat Commun. 4:2429.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。