BioAssay Systems 胰凝乳蛋白酶抑制劑試劑盒-評估藥物和篩選潛在的胰凝乳蛋白酶抑制劑

胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin，EC 3.4.21.1）是一種消化性絲氨酸蛋白酶，它在許多真核生物和原核生物中水解膳食蛋白質。胰凝乳蛋白酶主要在芳香族氨基酸苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的羧基側切割肽鏈。BioAssay Systems的QuantiFluo?胰凝乳蛋白酶抑制劑檢測試劑盒使用了一種熒光素異硫氰酸酯（FITC）標記的合成底物。熒光素標記的熒光被高度猝滅。當樣本中的胰凝乳蛋白酶消化底物時，底物被切割成較小的肽段，從而消除了熒光猝滅。在λex/em = 485/530 nm處測量FITC標記片段的熒光或熒光偏振（FP）。通過熒光的減少來確定抑制作用。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品胰凝乳蛋白酶抑制劑試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點  

- 安全。非放射性檢測。  

- 均相且便捷。均相“混合-孵育-測量”型檢測法。無需洗滌和試劑轉移步驟。  

- 穩定且高通量?？奢p松自動化，每天可檢測數千個樣本。檢測具有很高的穩定性，Z’因子>0.8。

應用  

- 用于評估藥物和篩選潛在的胰凝乳蛋白酶抑制劑。

試劑盒內容（96孔板檢測100次）  

- 檢測緩沖液：10 mL  

- 底物：100 ?L  

儲存條件  

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。保質期：收貨后6個月。

注意事項  

試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規安全措施。請參考材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作步驟  

- 在檢測前，將所有組分平衡至室溫。本檢測基于動力學反應。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑時應迅速，混合應簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在室溫下進行。注意：本試劑盒不包括酶或抑制劑?？蛻粜枳孕刑峁┧璧拿富蛞种苿?/p>

樣本準備：  

- 為防止自消化，純胰凝乳蛋白酶溶液可在酸性條件下（1 mM HCl，pH 3.0）長期儲存于-80°C?？杉尤? mM CaCl?以穩定儲存液。將純化的胰凝乳蛋白酶稀釋于檢測緩沖液中。胰凝乳蛋白酶應置于冰上，并盡快使用。在本實驗中，每個孔中使用了10 U/mL的胰凝乳蛋白酶。將測試化合物溶解于適當的溶劑中（例如DMSO）。在使用之前，應先測試酶對溶劑的耐受性。對于豬胰凝乳蛋白酶，檢測中DMSO的最終濃度應<2%。

96孔板抑制劑篩選：  

1. 將30 ?L胰凝乳蛋白酶分別加入黑色平底96孔板的不同孔中（反應中為10 U/mL胰凝乳蛋白酶）。同時，分別準備30 ?L胰凝乳蛋白酶（“對照”）和30 ?L檢測緩沖液（“空白”）孔。  

2. 向對照和空白孔中加入10 ?L溶解測試化合物的緩沖液溶劑。例如，如果測試化合物溶解于含有0.1% DMSO的緩沖液中，則向這些孔中加入10 ?L該溶液。  

3. 向其余含有酶的孔中加入10 ?L測試化合物。輕拍平板混合，并在室溫下孵育15分鐘，以使抑制劑阻斷酶活性。  

4. 通過將1 ?L底物和99 ?L檢測緩沖液混合，為每個孔準備足夠量的工作試劑。向所有孔中加入80 ?L工作試劑。輕拍平板混合。在室溫下避光孵育30分鐘。在λex/em = 485/530 nm處讀取熒光或熒光偏振（FP）。

所需材料（但未提供）  

- 純化的胰凝乳蛋白酶（例如MedChemExpress，貨號HY108910）以及（如果需要）胰凝乳蛋白酶抑制劑對照（例如大豆胰蛋白酶抑制劑，Cayman Chemical，貨號14502）。  

- 移液裝置及配件（例如多通道移液器）、黑色平底96孔板（例如Corning Costar）、離心管，以及能夠讀取λex/em = 485/530 nm處熒光或熒光偏振的微孔板讀數儀。

胰凝乳蛋白酶抑制曲線  ：

- 左圖：胰凝乳蛋白酶與不同濃度的大豆胰蛋白酶抑制劑孵育，生成熒光IC??曲線。  

- 右圖：為熒光偏振（FP）測量生成了第二個IC??曲線。

文學：

1. López-Otín, C., Bond, J. S. (2008). Proteases: multifunctional enzymes in life and disease. Journal of Biological Chemistry, 283(45): 30433–30437.

2. Shah, D., Mital, K. (2018). The Role of Trypsin: Chymotrypsin in Tissue Repair. Advances in Therapy, 35(1): 31–42.

3. Vreeke, G. J. C., et al. (2023). The path of proteolysis by bovine chymotrypsin. Food research international (Ottawa, Ont.), 165: 112485. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

作為BioAssay Systems在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產品。