瓜氨酸化修飾（Citrullination）研究 “加速器”！

全套研究組合方案，從檢測到機制解析的全流程科研方案

瓜氨酸化修飾（Citrullination）是關鍵的蛋白質翻譯后修飾，由肽酰精氨酸脫亞胺酶（PADs）催化，將蛋白質中的精氨酸殘基轉化為瓜氨酸殘基，通過改變氨基酸電荷與結構，調控蛋白質構象、結合能力及功能。其在人體生理活動中作用核心，如中性粒細胞通過 PAD4 催化組蛋白瓜氨酸化形成胞外陷阱（NETs）抵御病原體，組蛋白瓜氨酸化還能重塑染色質影響基因表達，PAD6 介導的修飾更保障卵母細胞成熟與胚胎發育。

而當 PAD 酶活性失控引發異常瓜氨酸化時，會打破生理平衡：在類風濕關節炎中，關節滑膜異常瓜氨酸化蛋白成為自身抗原，誘發免疫攻擊；在腫瘤、神經退行性疾病中，異常修飾也參與病理進程。因此，深入解析瓜氨酸化修飾的機制、關聯疾病的分子機制，需依賴系統的研究工具與方法組合，為后續探索提供基礎。

一、產品概述

二、產品組合策略（基于研究需求，僅供參考）

組合 1：瓜氨酸化組蛋白（H3/H4）特異性檢測與驗證

·研究方向：精準檢測樣本中 H3/H4 瓜氨酸化修飾，排除假陽性

·核心產品：44902（H3 HRP 單抗）+ 17926（人重組 H3）+ 38258（人重組 H4）+ 30773（泛 Citrulline 單抗）

·互補邏輯：

a. 重組 H3/H4（17926/38258）作為陽性對照，確保檢測體系有效；

b. 44902 靶向 H3 特異性位點，30773 泛識別瓜氨酸化，二者結果互證，避免單一抗體偏差。

組合 2：瓜氨酸化蛋白 “富集 - 鑒定 - 定量” 閉環

·研究方向：從復雜樣本中分離瓜氨酸化蛋白，明確修飾位點并定量

·核心產品：44657（H3 親和樹脂）+ 17450（瓜氨酸探針）+ 44511（泛 Citrulline HRP 單抗）+ 27769（H3 R26 肽標準品）

·互補邏輯：

c. 44657 富集 H3 瓜氨酸化蛋白，17450 標記全樣本瓜氨酸化蛋白，覆蓋 “特異性富集 + 全譜標記”；

d. 44511 定量總修飾水平，27769 校準 H3 單一位點含量，實現 “定性（富集 / 標記）- 定量（抗體 / 標準品）” 閉環。

組合 3：自身免疫?。ㄈ?RA）瓜氨酸化相關抗體篩查

·研究方向：篩查患者樣本中瓜氨酸化靶標自身抗體，驗證抗原特異性

·核心產品：502120（10 重 Panel）+ 17939（H3 單抗）+ 20582（牛源核心組蛋白）+ 44412（低內毒素泛 Citrulline 單抗）

·互補邏輯：

e. 502120 高通量篩查多靶標抗體（如 PAD4、瓜氨酸化纖維蛋白原）；

f. 20582 作為陽性抗原對照，17939/44412 驗證 H3 瓜氨酸化抗原與抗體的特異性結合，適配臨床樣本檢測需求。

三、實驗設計（關鍵步驟 + 合理預期）

方案 1：LPS 誘導巨噬細胞 H3/H4 瓜氨酸化檢測

1. 研究目標

驗證炎癥刺激下（LPS）巨噬細胞中 H3/H4 瓜氨酸化水平變化

2. 核心材料

·細胞：RAW264.7 巨噬細胞

·產品：44902、30773、17926、38258

3. 關鍵步驟

1）. 樣本處理：細胞分對照組（無處理）、LPS 組（1μg/mL，孵育 6/12/24h），提取核蛋白并定量；

2）. WB 檢測：核蛋白（20μg）+ 陽性對照（17926/38258，5μg）上樣，一抗用 44902（1:1000）、30773（1:2000），HRP 二抗顯影，ImageJ 定量條帶灰度；

3）. ELISA 驗證：核蛋白包被 96 孔板，44902/30773 檢測，450nm 讀值，計算修飾水平。

4. 預期結果（基于文獻共識）

·LPS 組 44902/30773 檢測的條帶灰度、ELISA OD 值顯著高于對照組，6h 達峰值（炎癥早期瓜氨酸化激活）；

·陽性對照條帶清晰，陰性對照（未修飾組蛋白）無信號，證明檢測特異性。

方案 2：乳腺癌細胞瓜氨酸化 H3 富集與鑒定

1. 研究目標

富集 MCF-7 細胞中瓜氨酸化 H3，鑒定修飾位點并定量

2. 核心材料

·細胞：MCF-7 乳腺癌細胞

·產品：44657、17450、44511、27769

3. 關鍵步驟

1）. 富集與標記：500μg 細胞總蛋白用 44657 孵育 4h（富集 H3），100μg 總蛋白用 17450（10μM）37℃標記 1h；

2）. WB 驗證富集效率：富集蛋白（20μg）、標記蛋白（20μg）上樣，44511（1:2000）檢測，比較富集前后條帶強度；

3）. 質譜與定量：富集蛋白胰酶酶解后 LC-MS/MS 鑒定修飾位點，用 27769 建立標準曲線，ELISA 定量 H3 R26 修飾含量。

4）. 預期結果（基于組蛋白修飾規律）

·富集后條帶強度是總蛋白的 5-10 倍（符合親和富集常規效率）；

·質譜鑒定到 H3 R2/R8/R17/R26 位點修飾（H3 常見瓜氨酸化位點），R2/R8/R17 豐度最高；

·H3 瓜氨酸化含量約 1.0-1.8ng/μg 總蛋白（基于類似腫瘤細胞研究的合理估算）。

方案 3：RA 患者血清瓜氨酸化自身抗體篩查

1. 研究目標

對比 RA 患者與健康人血清中瓜氨酸化相關自身抗體差異

2. 核心材料

·樣本：RA 患者血清（30 例）、健康人血清（30 例）

·產品：502120（10 重 Panel）+ 20582（牛源組蛋白）+ 17939（H3 單抗）

3. 關鍵步驟

1）. Panel 篩查：血清稀釋 1:100，按 502120 說明書操作，熒光檢測并計算各抗體濃度；

2）. WB 驗證：20582（1μg / 孔）、17926（1μg / 孔）轉膜，血清（1:200）為一抗，HRP 二抗顯影，比較兩組條帶；

3）. 免疫熒光共定位：LPS 誘導 RAW264.7 瓜氨酸化，爬片后用 RA 血清（1:100）+17939（1:500）孵育，共聚焦觀察共定位。

4）. 預期結果（基于 RA 臨床研究共識）

·RA 組瓜氨酸化組蛋白 / PAD4 / 纖維蛋白原自身抗體濃度顯著高于健康組（P<0.05），未修飾靶標抗體無差異；

·RA 血清與 20582/17926 結合條帶強度更高；

·血清抗體與 17939 標記的 H3 在細胞核共定位（證明抗體特異性結合瓜氨酸化 H3）。

四、應用價值（聚焦實際需求）

1. 基礎機制研究

·組合 1 可解析 H3/H4 瓜氨酸化在炎癥 / 腫瘤中的位點特異性功能（如 H3 R26 修飾與 DNA 損傷修復的關聯）；

·組合 2 的 “富集 - 質譜” 流程可發現新的瓜氨酸化靶蛋白，補充修飾機制研究。

2. 疾病標志物開發

·組合 3 可篩選 RA “瓜氨酸化蛋白 - 自身抗體” 雙標志物（如瓜氨酸化 H3 + 抗 H3 抗體），提升診斷靈敏度（較單一標志物高 20%-30%，參考臨床檢測常規提升范圍）；

·組合 2 可發現腫瘤特異性瓜氨酸化位點（如 MCF-7 中 H3 R26 修飾），為癌癥早期診斷提供靶點。

3. 藥物研發支持

·基于組合 1 建立 PAD 酶抑制劑篩選模型：LPS 誘導巨噬細胞后，用 44902/30773 檢測藥物對 H3/H4 瓜氨酸化的抑制效果，評估候選藥物活性；

·組合 3 可用于藥物臨床試驗：監測 RA 患者治療后瓜氨酸化自身抗體水平變化，評估療效。

Cayman Chemical的瓜氨酸化產品線不僅產品種類齊全，而且彼此之間具有很強的協同性和互補性。研究人員可以根據具體科學問題，靈活搭配這些工具，構建從基礎到轉化、從體外到體內的高效研究路徑，有力推動瓜氨酸化這一重要蛋白質翻譯后修飾領域的科學發展。

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