SPY555-DNA探針--明亮且無毒的活細胞核染料

SPY555-DNA是一種基于我們SPY?染料系列的明亮且無毒的活細胞核染料。其優化的結構能夠快速標記活細胞和固定細胞中的DNA，具有高特異性和極低的背景信號。SPY555-DNA可以在不需要遺傳操作或熒光蛋白過表達的情況下，對活細胞或固定細胞的細胞核進行染色。其吸收和發射特性與四甲基羅丹明（TMR）相似。SPY555-DNA能夠與SPY505、SPY595、SPY650、SPY700、SiR和GFP進行多色成像。SPY555-DNA可以使用標準的TMR或Cy3濾光片組進行成像。它適用于活細胞或固定細胞和組織的寬場、共聚焦、SIM或STED成像。包含1瓶SPY555-DNA（凍干）。

艾美捷SPY555-DNA探針（#CY-SC201）：

吸收峰（λabs）：555 nm

熒光峰（λfl）：580 nm

是否適用于固定細胞：是，適用于PFA和甲醇固定的細胞

探針數量：100次染色

熒光壽命：2.4 ns

STED耗竭波長：660或775 nm

運輸條件：室溫

儲存與操作：

收到后將探針儲存于-20°C或更低溫度。凍干探針在室溫下可穩定保存超過1周，在-20°C下可穩定保存超過12個月。使用無水DMSO復溶SPY555-DNA。我們建議使用新開封的無水DMSO來制備1000倍濃縮液。DMSO在接觸空氣和水分時會產生降解產物，這些產物即使在-20°C下也會顯著縮短溶液中探針的保質期。使用后，將1000倍濃縮液保存在-20°C或更低溫度。在打開前，應將小瓶恢復至室溫。如果儲存得當，1000倍濃縮液可穩定保存3個月。注意：DMSO溶液應特別小心處理，因為DMSO已知會促進有機分子進入組織。請按照所有相關的當地規定處理這些試劑。

標記協議：

注意：本協議是使用貼壁于蓋玻片的HeLa細胞優化的，并已在其他常見細胞系中得到驗證。本協議中的建議應作為起點，每種細胞類型的最優標記條件應通過實驗確定。SPY555-DNA基于DNA小溝結合分子雙苯并咪唑。在高劑量下，它可能會改變活細胞中的DNA代謝。因此，如果計劃進行長期（>12小時）成像實驗，建議使用1000倍或更高稀釋度的SPY555-DNA進行染色。對于其他所有用途，建議使用1000倍稀釋度的SPY555-DNA進行染色。

制備1000倍濃縮液：向SPY555-DNA小瓶中加入50 ?L無水DMSO，制備1000倍濃縮液。我們建議使用新開封的無水DMSO來制備1000倍濃縮液。DMSO在接觸空氣和水分時會產生降解產物，這些產物即使在-20°C下也會顯著縮短溶液中探針的保質期。此時，溶液可能有顏色，但這不會影響探針的性能。使用后，應將該溶液保存在-20°C或更低溫度。不要將1000倍濃縮液分裝成小份，因為它們會更快降解，且探針不會因多次凍融循環而改變。如果儲存得當，該濃縮液可穩定保存3個月。

制備染色液：在常用的細胞培養基（例如DMEM + 10%胎牛血清）中將SPY555-DNA稀釋至1倍濃度，并短暫渦旋。如果稀釋不是一步完成，請使用DMSO制備中間稀釋液，因為使用水性緩沖液制備中間稀釋液會導致探針聚集?？焖龠M行下一步。由于染色效率可能因細胞系而異，建議首次嘗試時使用1000倍稀釋度進行染色，然后在后續實驗中優化SPY555-DNA的稀釋倍數，直至獲得最佳染色效果（參見下表中的標記濃度和孵育時間）。僅使用新制備的染色液，不要多次使用。

細胞準備和染色：按照常規方法在蓋玻片、玻璃底培養皿或玻璃底多孔板上培養細胞。當細胞達到所需密度時，用步驟2新制備的染色液替換培養基，確保所有細胞都被溶液覆蓋。將細胞置于37°C、含5% CO?的濕潤環境中孵育，并根據確定標記時間作為探針濃度的函數。

注意：SPY555-DNA可以染色用甲醛（PFA）和甲醇固定的細胞中的DNA。

細胞成像：使用標準TMR或Cy3設置對SPY555-DNA進行成像效果最佳。標記后，活細胞可以立即成像，無需洗滌步驟?？蛇x地，用不含探針的新鮮培養基替換一次標記液通?？梢蕴岣咝旁氡取Ｈ绻M行時間序列成像，建議在整個實驗過程中保持成像介質中含有探針，以獲得穩定的信號。如果在成像前對細胞進行了洗滌，染色效果將持續數小時。請注意，SPY555-DNA可能會被360-390 nm的光激發，并由于探針的DNA結合部分的熒光而在約450 nm處產生一些熒光。

*基于以下條件：每次染色實驗使用0.5 ml染色溶液，探針濃度為1倍。通過減少體積或探針濃度，可以進一步增加染色實驗的次數。

**標記時間是針對HeLa細胞確定的，可能會因使用的細胞系而有所不同。