Tubulin聚合檢測(熒光法96assays 豬腦微管蛋白)試劑盒-研究更昂貴的癌細胞微管蛋白試劑和高通量應用選擇

本檢測是一種經濟高效的一步法程序，用于測定藥物或蛋白質對微管蛋白聚合的影響。它是基于Bonne, D.等人（1）最初描述的檢測方法的改進版。聚合過程通過熒光增強來跟蹤，因為熒光報告分子在聚合過程中被整合到微管中。標準檢測使用神經元微管蛋白（貨號T240），生成代表微管形成三個階段的聚合曲線，即成核、生長和穩態平衡。其他微管蛋白，如HeLa細胞微管蛋白（貨號H001），也可以用于此檢測。每次檢測的體積為50 ?L，微管蛋白濃度低（最終濃度為2 mg/ml，每次檢測100 ?g），這使得它成為研究更昂貴的癌細胞微管蛋白試劑和高通量應用的理想選擇。

經典的微管蛋白聚合檢測使用340 nm處的吸光度讀數來跟蹤微管的形成。它基于這樣一個事實：微管散射光的程度與微管聚合物的濃度成正比。Cytoskeleton, Inc.提供這種基于吸光度的檢測（貨號BK006P）。

艾美捷Tubulin聚合檢測(熒光法96assays 豬腦微管蛋白)試劑盒（#BK011P）內容：

試劑盒包含足夠進行96次50 ?L格式檢測的材料。包含以下組分：

>99%純度的微管蛋白（貨號T240）

含熒光報告分子的通用微管蛋白緩沖液

微管甘油緩沖液（貨號BST05）

GTP溶液（貨號BST06）

紫杉醇陽性對照（貨號TXD01）

半面積96孔板。黑色，平底

詳細的操作手冊和廣泛的故障排除指南

Tubulin聚合檢測(熒光法96assays 豬腦微管蛋白)試劑盒用途包括：

1成本效益高的抗癌化合物高通量篩選。

2基礎研究，用于測定化合物對微管蛋白的IC50值和特異性。

3篩選對微管蛋白聚合活性有影響的蛋白質。

4作為藥理學本科/研究生課程的教學輔助工具。

所需設備：配備340-360 nm激發濾光片和420-450 nm發射濾光片的溫控96孔板熒光光度計

示例結果：

與微管蛋白相互作用的化合物或蛋白質通常會改變聚合的一個或多個特征階段。例如，圖1顯示了向標準聚合反應中加入抗有絲分裂藥物紫杉醇的效果。3 ?M濃度的紫杉醇消除了成核階段，并增強了生長階段的最大反應速率（Vmax）。因此，本檢測的一個應用是鑒定新型抗有絲分裂藥物。圖1還顯示了加入微管解聚藥物長春堿的效果。在3 ?M的最終濃度下，長春堿導致Vmax大幅下降和最終聚合物質量減少。

圖1：使用基于熒光的微管蛋白聚合檢測（BK011P）進行的微管蛋白聚合。微管蛋白單獨孵育（對照組），或與紫杉醇或長春堿共同孵育。每種條件均進行雙份檢測。通過在360 nm處激發和在420 nm處發射來測量聚合。對照組聚合曲線的三個階段已標記：I. 成核；II. 生長；III. 穩態平衡。

文獻參考：

Bonne, D., Heusele, C., Simon, C., and Pantaloni, D.  (1985).  4’, 6-Diamidino-2-phenylindole, a fluorescent probe for tubulin and mictrotubules. J. Biol. Chem. 260, 2819-2825.