補體P因子定量檢測試劑盒：助力炎癥和免疫反應研究

研究目的：

目的是定量測試樣本中人類因子P的含量。該產品僅供經過培訓的實驗室人員使用。不得使用結果用于臨床診斷或患者管理。僅供研究使用。

艾美捷補體P因子定量檢測試劑盒（Complement Factor P Quantitative assay）（#COMPL FPQ RUO）的測定原理：

補體因子P定量分析是一種夾心ELISA，用于定量分析例如血清或血漿樣本中的人體因子P。該分析基于96孔板中固定的抗體，捕獲在板中孵化的測試樣本中的因子P。用HRP標記的二級抗體檢測結合的因子P。隨后HRP催化底物的切割，引起顏色變化，與測試樣本中因子P的濃度相關。

需要但未提供的物料或設備：

帶有450納米和620納米濾光片的酶標儀

軌道搖床（除非包含在酶標儀的功能中）

帶一次性吸頭的精密移液管

96孔板或條的洗滌器

吸水紙

試劑和樣品稀釋用的容器

計時器

穩定性和儲存：

試劑應儲存在2-8°C。在2-8°C下儲存時，稀釋后的洗滌液有效期至套件的有效期。

標本收集和準備：

應使用無菌靜脈穿刺技術收集全血樣本，并使用標準程序獲得血清或EDTA血漿。建議每個樣本至少抽取5毫升全血。離心血樣并將無細胞血清或血漿轉移到干凈的試管中。

離心后的血清或EDTA血漿可保存在4°C。較長時間儲存時，血清和血漿樣本應冷凍在-20°C或更低溫度。建議在分析前不要將測試樣本凍融超過兩次。

每個實驗室應確定測試樣本儲存條件的可接受性，因為這可能因預分析因素而異。

結果評估：

對于每個數據點，從450納米波長減去620納米參考波長，并計算所有重復樣本的平均吸光度值。

通過繪制六種校準器的吸光度與濃度（0 ng/ml、12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和200 ng/ml）構建校準曲線。

在這個應用說明的例子中（圖2），使用了4參數曲線擬合，但用戶可以選擇不同的曲線擬合。根據校準曲線讀取未知樣本的濃度。

注意：要計算樣本中因子P的濃度，必須根據上述協議進行稀釋補償，即200倍。如果選擇了不同的樣本稀釋，應相應地進行補償。

補體P因子定量檢測試劑盒校準曲線示例：

請注意：上圖顯示了一個標準曲線的示例，不應用于實際樣品解釋。

補體P因子定量檢測試劑盒文獻參考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(8) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.