補體P因子功能檢測試劑盒--補體系統研究工具

研究目的：

目的是確定測試樣本中因子P的功能。功能性是定性地與校準器（人血清）相關聯來確定的，校準器被設定為100%功能性。

僅限于訓練有素的實驗室人員使用。結果不得用于臨床診斷或患者管理。僅限研究使用。

概述和解釋

因子P（補體P，適當蛋白，FP）是補體激活替代途徑（AP）的正向調節器和啟動因子。它結合到表面結合的C3和C5轉化酶并穩定它們，以放大激活級聯反應1。因子P的結合使轉化酶復合體的半衰期增加約10倍2。有觀點（盡管存在爭議）認為，因子P也可以通過結合例如細胞表面或某些生物基質，招募C3b或C3(H2O)和因子B，從而啟動AP途徑1,3。因子P對抗因子H的負向調節，后者增強C3b和Bb的解離并介導因子I對C3b的切割，轉化為非活性的iC3b3（圖1）。

圖1：因子P作為替代補體途徑的穩定劑和啟動因子（左），以及因子H的對立負向調節（右）。

與大多數補體蛋白不同，因子P不是在肝細胞中產生的，而是由包括單核細胞、巨噬細胞、T細胞和粒細胞在內的幾種細胞類型產生。很可能局部刺激下因子P的短暫濃度增加會增強AP4。例如，中性粒細胞含有因子P的顆粒，這些顆粒在刺激下分泌，并且可以增強血小板-粒細胞聚集體的形成1。

在血漿中，因子P的濃度大約為4-25 ?g/mL5。因子P是一個延長的53 kDa糖蛋白，在體內以二聚體、三聚體或四聚體（P2、P3和P4）的形式寡聚，比例為26:54:20（P2:P3:P4），形成頭對尾結構5,6。寡聚狀態與C3轉化酶穩定功能相關，寡聚體的分布影響因子P的整體功能性7。

突變、缺乏、蛋白水平以及因子P的蛋白沉積與疾病和障礙有關，由Chen等人總結3。缺乏通常增加對腦膜炎球菌病和其他傳染病的易感性8。改變的血清水平已與例如C3腎小球病、狼瘡性腎炎、敗血癥和慢性心力衰竭以及IgA腎病相關聯9。

艾美捷補體P因子功能檢測試劑盒（Complement Factor P Functional assay）（#COMPL FPF RUO）的測定原理：

因子P功能測定是一種酶聯免疫吸附測定（ELISA）將功能性補體活性測定的原理與標記的使用相結合對沉積的補體蛋白具有特異性的抗體。已存入的補充金額蛋白質與樣品中因子P的功能活性成正比。

補體P因子功能檢測試劑盒組成：

一個帶有微孔板（12x8）的框架，孔內涂有抗因子P單克隆抗體，用鋁箔包裝，并附有干燥劑包。

1.5毫升陰性對照（NC），綠色，綠色瓶蓋。即用型。

3.0毫升校準器，200納克/毫升。即用型。

32毫升稀釋液（Dil），紅色。即用型。

30毫升洗滌溶液，30倍濃縮。

活化劑，凍干型。

15毫升活化劑稀釋液。即用型。

3.0毫升猝滅液。即用型。

7.5毫升結合物含有針對C3b的HRP標記抗體，藍色，棕色瓶。即用型。

15毫升底物TMB，棕色瓶。即用型。

15毫升終止液（0.5M H2SO4）。即用型。

需要但未提供的物料或設備：

帶有450納米和620納米濾光片的酶標儀

軌道搖床（200轉/分鐘）

帶一次性吸頭的精密移液管

96孔板或條的密封膜

96孔板或條的洗滌器

吸水紙

試劑和樣品稀釋用的容器

冰或相應的板冷卻設備

計時器

穩定性和儲存：

所有試劑應儲存在2-8°C，活化劑除外。在2-8°C下儲存時，稀釋后的洗滌液有效期至套件的有效期。

凍干活化劑應儲存在-20°C或更低溫度。復溶后的活化劑可以在-70°C下冷凍，并且只能解凍一次。

標本收集和準備：

應使用無菌靜脈穿刺技術收集全血樣本，并使用標準程序獲得血清或EDTA血漿。建議每個樣本至少抽取5毫升全血。離心血樣并將無細胞血清或血漿轉移到干凈的試管中。

離心后的血清或EDTA血漿可保存在4°C。較長時間儲存時，血清和血漿樣本應冷凍在-20°C或更低溫度。建議在分析前不要將測試樣本凍融超過兩次。

每個實驗室應確定測試樣本儲存條件的可接受性，因為這可能因預分析因素而異。

在進行補體P功能性分析之前，確定每個測試樣本中因子P的濃度。對于這種因子P濃度的測定，可以使用Svar Life Sciences AB提供的因子P定量分析。

補體P因子功能檢測試劑盒文獻參考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Moore, S. R.; Menon, S. S.; Galwankar, N. S.; Khuder, S. A.; Pangburn, M. K.; Ferreira, V. P. A Novel Assay That Characterizes Properdin Function Shows Neutrophil-Derived Properdin Has a Distinct Oligomeric Distribution. Frontiers in Immunology 2023, 13.

(8) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(9) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.