BPS Bioscience 全長 Notch1/CSL 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系，用于藥物發現和免疫治療研究

描述

全長Notch1/CSL熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種表達螢火蟲熒光素酶報告基因的HEK293細胞系，該報告基因受Notch響應元件（CSL響應元件）和全長Notch1（登錄號：NM_017617.5）的控制。在配體-受體相互作用后，Notch1受體被γ-分泌酶切割。這種活躍的Notch1 NICD（Notch細胞內域）轉移到細胞核并誘導熒光素酶報告基因的表達。

該細胞系在DAPT和DLL4的作用下，對熒光素酶報告基因表達的激活和抑制都進行了功能性驗證。

背景

Notch信號通路在進化上高度保守，在癌癥中作為維持癌癥干細胞特性和誘導腫瘤血管生成的關鍵驅動因素發揮著重要作用。哺乳動物擁有四種不同的單跨膜Notch受體，即Notch1-4。Notch配體有兩個家族的跨膜蛋白，包括Delta樣配體（DLL1、DLL3和DLL4）和Jagged（JAG1和JAG2）。Notch信號通路由配體-受體結合啟動，經歷由ADAM（含血栓素結構域的解聚素和金屬蛋白酶）家族蛋白酶和γ-分泌酶進行的兩步蛋白水解切割。釋放的Notch細胞內域（NICD）轉移到細胞核，并與具有DNA結合轉錄因子RBP-J（CSL）、mastermind-like（MAML）蛋白和其他共激活蛋白的轉錄復合體相互作用，以刺激Notch靶基因的表達。Notch信號通路可以通過兩大類Notch抑制劑阻斷：小分子γ-分泌酶抑制劑和特異性結合Notch配體或受體的單克隆抗體。Notch信號參與多種組織和器官的發育和穩態。Notch信號的功能障礙有嚴重后果，包括發育病理或癌癥（如T細胞急性淋巴細胞性白血病、T-ALL和尿路上皮膀胱癌）。Notch抑制劑的使用，主要是γ-分泌酶抑制劑，作為癌癥治療選項和組織再生正在進行中。進一步的研究將使我們對Notch信號有更深入的理解，并將有利于未來的治療途徑。

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應用

? 篩選和驗證針對Notch1的抗體，用于藥物發現和免疫治療研究。

? 在細胞模型中篩選Notch信號通路的小分子抑制劑。

? 進行配體/受體結合實驗，篩選潛在的Notch1通路抑制劑。

細胞解凍

1. 從液氮儲存中取出一個細胞瓶。在準備解凍前保持在干冰上。

2. 準備解凍時，在37°C水浴中搖晃冷凍細胞瓶大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內容物轉移到一個空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C水浴中放置過久會導致細胞活性迅速喪失。

3. 使用10毫升的血清學移液管，慢慢向含有細胞的錐形管中加入10毫升預溫的解凍培養基1。解凍培養基1應滴加同時輕輕搖晃錐形管，以實現溫和混合并避免滲透休克。

4. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預溫的解凍培養基1中重懸細胞。

5. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

6. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養基1，并在37°C的5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

7. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1A。

細胞傳代

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1A并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1A中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:10至1:20，每周一次或兩次接種到新的培養容器中。

細胞冷凍

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1A并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C的細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞至約2 x 10^6細胞/毫升。

數據展示：

圖1：全長Notch1/CSL熒光素酶報告基因HEK293細胞系中Notch1表達的流式細胞儀分析。

全長Notch1/CSL熒光素酶報告基因HEK293細胞（綠色）和CSL報告基因HEK293對照細胞（藍色）用PE偶聯的抗人Notch 1抗體（Biolegend #352106）染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸代表細胞數量百分比。X軸表示PE的強度。

文獻參考：

Lu F.M., et al., 1996 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(11): 5663-5667.

Kanungo J., et al., 2008 J. Neurochem. 106: 2236-48.

Cao L. et al., 2023 Blood Adv. 10.1182/bloodadvances.2023010380

Zhou B., et al., 2022 Nature 7:95

Benedito R., et al., 2009 Cell.12;137(6):1124-35.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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