BPS Bioscience BAFF/APRIL 響應型 BCMA-NF-κB 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系方案

BAFF/APRIL反應性BCMA-NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種HEK293細胞系，該細胞系在CMV啟動子的控制下表達全長人類BCMA（B細胞成熟抗原）（NM_001192），以實現高組成表達，以及NF-κB（核因子κB）-熒光素酶報告基因。熒光素酶報告基因由位于最小啟動子上游的NF-κB響應元件控制。配體結合后，BCMA將啟動NF-κB信號通路，導致NF-κB控制的熒光素酶報告基因的表達。

這一細胞系已被證明對BAFF（B細胞激活因子）和APRIL（增殖誘導配體）有反應。

背景

B細胞成熟抗原（BCMA），也稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員17（TNFRSF17）或CD269，是由TNFRSF17基因編碼的I型膜蛋白。TNFRSF17是TNF受體超家族的細胞表面受體，識別其配體，包括BAFF（B細胞激活因子）和APRIL（增殖誘導配體）。BCMA在成熟的B淋巴細胞和多發性骨髓瘤（MM）細胞上優先表達。體外實驗中，BCMA的激活促進B細胞的分化和增殖。BCMA誘導的信號轉導涉及大量細胞內活動，包括激活NF-κB信號通路。BAFF和APRIL作為可溶性同源三聚體的生物活性區分了它們與其他TNFSF配體，如TRAIL、FasL和CD40L，后者僅作為膜結合分子活躍。

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應用

? 在細胞模型中監測BCMA/NF-κB信號通路活性。

? 篩選對BCMA/NF-κB信號通路有活性的化合物。

細胞培養協議

細胞復蘇

1. 在37°C水浴中旋轉冷凍細胞瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶內的全部內容轉移到含有10毫升預熱的解凍培養基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞過久會導致細胞活力迅速下降。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預熱的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養基1，并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養，直到細胞準備好傳代。

5. 在細胞完全融合之前應進行傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1A。

細胞傳代

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 用0.05%胰蛋白酶/EDTA處理細胞，直至細胞脫落所需的最短時間（大約30秒至1分鐘）。使用顯微鏡確認細胞脫落。

3. 一旦細胞脫落，加入生長培養基1A并轉移到管中。

4. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1A中重懸細胞。

5. 按推薦的亞培養比例1:6至1:10每周一次或兩次播種到新的培養容器中。

注意：解凍后和在低密度時，細胞可能生長速度較慢。建議在培養初期以大約1:4的比例分離細胞。經過幾次傳代后，細胞生長速度增加，可以以更高的比例分離細胞。

細胞冷凍

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞脫落，加入生長培養基1A并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，濃度約為2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升細胞懸浮液分裝到每個冷凍管中。將管放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜儲存。

注意：建議在早期傳代擴展細胞并至少冷凍10管細胞以備將來使用。

圖1：流式細胞儀分析BAFF/APRIL反應性BCMA NF-κB HEK293細胞系中BCMA細胞表面表達。

BAFF/APRIL反應性BCMA NF-κB-HEK293細胞（綠色）和對照親本NF-κB-HEK293細胞（藍色）用PE抗人CD269（BCMA）抗體（Biolegend #357503）染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸表示細胞數量百分比。X軸表示PE強度。

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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