BPS Bioscience 轉鐵蛋白受體蛋白-1 (TFRC) HEK293 細胞系，研究轉鐵蛋白及其衍生物在細胞攝取實驗中的內吞作用動力學

轉鐵蛋白受體蛋白-1（TFRC）是一種細胞表面受體，它以高親和力結合血液中負載鐵的轉鐵蛋白，以促進鐵吸收到細胞中。因此，TFRC是人體鐵供應鏈和總體穩態的組成部分。細胞內鐵水平、缺氧和CRE信號調節TFRC轉錄。此外，TFRC與多種形式癌癥的腫瘤進展階段相關。在細胞水平上，鐵過量會導致氧自由基形成和細胞功能障礙，而缺鐵會導致細胞快速死亡。因此，鐵水平失調與多種疾病狀態相關，包括帕金森病、肌萎縮側索硬化癥（ALS）、亨廷頓氏病、多發性硬化癥（MS）和腫瘤發生。

同樣重要的是TFRC的潛在治療用途。由于TFRC在腫瘤細胞表面上調，它已被靶向抑制成人T細胞白血病/淋巴瘤。此外，TFRC在神經系統疾病的治療中發現了重要的效用。中樞神經系統（CNS）領域的藥物發現歷來受到血腦屏障（BBB）治療方法有限的挑戰。由于TFRC在血腦屏障內的腦毛細血管內皮細胞表面高度表達，因此正在開發藥物遞送策略，以利用TFRC結合實體從血液到中樞神經系統的轉胞作用（即受體介導的轉運，或RMT）。目前的方法包括包被TFRC配體轉鐵蛋白的聚乙二醇化脂質體，以及與攜帶治療有效載荷的納米顆粒（免疫脂質體）連接的抗TFRC抗體。

轉鐵蛋白受體蛋白-1（TFRC）HEK293細胞系是經過工程改造的HEK293細胞，可表達全長人類轉鐵蛋白受體蛋白-1（TFRC和TFR1，也稱為人CD71蛋白，GenBank登錄#NM_001128148），一種參與鐵穩態的細胞表面受體。鐵穩態失調與多種疾病，包括帕金森病、肌萎縮側索硬化癥（ALS）、亨廷頓氏病、，多發性硬化癥（MS）和腫瘤發生。通過流式細胞術驗證了該細胞系的表面表達TFRC可以用于多種應用，如轉鐵蛋白內吞作用研究和結合測定。

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應用

? 在細胞環境中篩選或進行針對人轉鐵蛋白受體-1設計的抗體的結合實驗。

? 研究轉鐵蛋白及其衍生物在細胞攝取實驗中的內吞作用動力學，以開發下一代培養基配方。

? 初步評估針對轉鐵蛋白受體的納米顆粒復合物（免疫脂質體）的設計，這些復合物旨在通過跨細胞轉運將治療性有效載荷輸送過血腦屏障（BBB）。

細胞培養協議

細胞解凍

1. 推薦將液氮中冷凍的細胞快速在37°C水浴中解凍，然后將整個小瓶內容物轉移到含有10毫升解凍培養基1的試管中。

2. 離心細胞，去除上清液，并在5毫升預溫的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，額外添加約3毫升的解凍培養基1，并繼續在37°C的CO2培養箱中培養，直到細胞準備好分裂。

5. 細胞應在完全融合前分裂。在第一次傳代時，切換到生長培養基1C。

細胞傳代

1. 要傳代細胞，移除培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.25%的胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 分離后，加入生長培養基1C，轉移到試管中，離心細胞，重懸細胞于生長培養基1C中，并將適量的細胞懸浮液接種到新的培養容器中。次培養比例：每5天大約1:5。

細胞冷凍

1. 要冷凍細胞，移除培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.25%的胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 分離后，加入解凍培養基1并計數細胞，然后轉移到試管中，離心細胞，并在4°C的冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸至約2 x 10^6細胞/毫升。

3. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

4. 次日轉移到液氮中保存。

數據展示：

圖1。流式細胞術驗證TFRC的表達。

使用PE偶聯的抗人TFRC抗體（抗CD71，BioLegend#334106）的流式細胞術檢測TFRC-HEK293重組細胞系（綠色）或親本HEK293細胞（藍色）。

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