BPS Bioscience Nav1.7-GFP HEK293 細胞系：神經生物學研究平臺

穩定重組HEK293細胞系，工程化設計用于多西環素誘導表達人類Nav1.7（Genbank #Q15858），在C末端融合綠色熒光蛋白[激發約395 nm，475 nm；發射約510 nm]，并帶有C末端鏈球菌素結合肽（SBP）融合。Nav1.7是一種河豚毒素敏感的電壓門控鈉通道IX亞型α亞基（SCN9A）。

Nav1.7是一種電壓門控鈉離子通道，由人類SCN9A基因編碼。它通常在兩種類型的神經元中高水平表達：背根神經節和三叉神經節的傷害感受神經元，以及交感神經節神經元，這些是自主（不自主）神經系統的一部分。

Nav1.7存在于痛覺感覺神經末梢，即傷害感受器附近，接近沖動發起區域。Nav1.7通道產生快速激活和失活的電流，對河豚毒素水平敏感。缺乏傷害感受器中Nav1.7的敲除小鼠顯示出對炎癥性疼痛反應減少[1]。

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應用

? 藥物化合物篩選

? 功能測定

細胞培養協議

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養基4（無Blasticidin或Zeocin）的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養基4（無Blasticidin或Zeocin）中重懸。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換培養基為新鮮的解凍培養基4（無Blasticidin或Zeocin），并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在首次傳代及后續傳代中，使用生長培養基4A（含Blasticidin和Zeocin）。

細胞傳代

1. 抽去培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% 胰酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基4A并轉移到試管中。以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基并將細胞在不含Blasticidin和Zeocin的生長培養基4A中重懸。按照每周1:10至1:15的期望亞培養比例，將細胞種入新的培養容器中。

細胞冷凍

1. 抽去培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% 胰酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基4A并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基并將細胞在4°C冷凍培養基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重懸，細胞濃度約為2 x 10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

目標蛋白表達的誘導

為了表達Nav1.7，細胞在收獲或測定前24小時用DMEM/F12 50/50補充10% FBS、1%青霉素/鏈霉素、1 ?g/ml多西環素（Biochemika #44577）和3 mM丁酸鈉（Acros Organics #263190250）誘導。

圖1. 表達Nav1.7的細胞的Western Blot。

使用抗鈉通道Nav1.7，克隆N68/6（Millipore #MABN41）染色的HEK293 Nav1.7細胞的Western Blot，隨后使用堿性磷酸酶偶聯的抗小鼠IgG（Rockland Immunochemicals #610-1502）。M：分子量標記。

文獻參考：

1. Catterall, W.A. Cell and Developmental Biology 16: 521–555 (2000).

2. Choi, J.S., et al. Neurology 67:1563-1567 (2006).

3. Li, Y., el al. Protein Science 20 (1): 140–149 (2011).

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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