BPS Bioscience OX40/NF-κB 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系，新型免疫調節劑篩選

OX40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種表達由NF-κB（核因子κB）響應元件控制的螢火蟲熒光素酶報告基因的HEK293細胞系，以及表達OX-40（腫瘤壞死因子受體超家族成員4，GenBank登錄號NM_003327）。

該細胞系已通過流式細胞術以及OX40L和抗OX40拮抗抗體進行了驗證。

圖1：OX40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞系的作用機制圖示。

背景：

OX40，也稱為CD134，是一種共刺激受體，屬于腫瘤壞死因子（TNF）受體家族，表達在T細胞表面。OX40與其配體OX40L（也稱為CD252）結合，可以增強T細胞的激活、分化、增殖、存活和T細胞效應功能。OX40L存在于NK細胞中，參與它們的激活和細胞毒性特征，以及樹突狀細胞中。OX40可以與TRAF（TNFR相關因子）家族蛋白成員結合，這些蛋白隨后可以調節NF-κB（核因子κB）信號通路。OX40和OX40L可以在癌細胞中找到，如AML（急性髓細胞性白血?。┖腿橄侔┘毎?。研究表明，OX40激動劑可以增加抗腫瘤免疫并改善前臨床研究中的無瘤存活?；蛘?，OX40拮抗劑作為治療炎癥性疾病的潛在藥物。開發新的OX40/OX40L活性調節劑是治療實體瘤或自身免疫性疾病患者的有希望的治療方法。

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應用：

- 表征OX40活性及其與配體的結合。

- 在細胞模型中篩選調節OX40信號的化合物。

細胞培養協議：

注意：HEK293細胞源自人類材料，因此建議采取適當的安全預防措施。

細胞解凍：

1. 在37°C水浴中旋轉冷凍細胞瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中的內容轉移到含有10毫升預熱的解凍培養基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞太久會導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預熱的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養基1，并在37°C、5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1A。

細胞傳代：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1A并轉移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1A中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:10每周一次或兩次將細胞種植到新的培養容器中。

細胞冷凍：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1A并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，細胞濃度約為2 x 10^6細胞/ml。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍瓶中。將瓶子放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將瓶子轉移到液氮中進行長期存儲。

注意：建議擴展細胞并在早期傳代時至少冷凍10瓶細胞以備將來使用。

數據示例：

圖

圖：OX40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞系中OX40的細胞表面表達。

OX40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞（藍色）和對照HEK293細胞（紅色）用抗OX40抗體，PE標記（#72064）染色，并通過流式細胞術分析。Y軸代表細胞數量百分比。X軸表示PE強度。

文獻參考：

Peng K., et al., 2014 AAPS J. 16(4): 625–633.

Marconato M., et al., 2022 Scientific Reports 12: 15856

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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